藏药多血康胶囊对脂多糖诱导小鼠急性肺损伤的预防作用及机制研究

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1、ChengduUniversityofTraditionalChineseMedicine（民族医药学院）二0一七届硕士研究生学位论文藏药多血康胶囊对脂多糖诱导小鼠急性肺损伤的预防作用及机制研究PreventionoflipopolysaccharideinducedautelunginjuryinmicebyTibetanmedicineDuoXueKangcapsuleanditsmechanism研究生姓名：胡晓鑫指导教师：降拥四郎学科专业：民族医学二〇一七年五月万方数据成都中医药大学2017届硕士论文学位论文藏药多血康胶囊对脂多糖诱导小鼠急性

2、肺损伤的预防作用及机制研究PreventionoflipopolysaccharideinducedautelunginjuryinmicebyTibetanmedicineDuoXueKangcapsuleanditsmechanism胡晓鑫指导教师姓名：降拥四郎主任藏医师申请学位级别：硕士专业名称：民族医学论文提交时间：2017年5月论文答辩时间：2017年5月二〇一七年五月万方数据成都中医药大学2017届硕士论文中文摘要藏药多血康胶囊是藏医大师措如·才朗在前期临床经验基础上拟定的著名经典方，由红景天、沙棘、余甘子、干姜组成，临床常用于治疗高原红

3、细胞增多症。方中红景天具有抗炎、抗疲劳、抗脂质过氧化、抗肿瘤、耐缺氧、活血化瘀等作用，近年研究表明红景天提取物能对抗化学品、生物毒素和慢性缺血引起的肺损伤，对抗变应性哮喘引起的气道炎症反应，对肺组织细胞具有保护作用；沙棘总黄酮具有血管内皮细胞保护作用，沙棘提取物对脂多糖诱导小鼠肺损伤实验中具有明显抑制炎症反应作用。因此，本实验研究提出“藏药多血康胶囊具有肺保护作用”的假说，并对其预防小鼠急性肺损伤（acutelunginjury,ALI）药效学和机制进行探讨。目的：通过动物实验观察藏药多血康胶囊对小鼠ALI的预防作用，并在此基础上探讨其作用机制，为后

4、期治疗肺部疾病的藏药新药开发提供药效学依据。方法：1.脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导ALI小鼠模型制作。雄性昆明种小鼠60只，分为空白组、气管滴注组和腹腔注射组，每组20只。气管滴注组气﹣1﹣1管滴入LPS（2mg·kg），腹腔注射组腹腔注射LPS（10mg·kg），造模10h后取材。记录各组小鼠死情况，观察肺组织大体改变，测定肺组织含水量、支气管肺泡灌洗液（bronchoalveolarlavagefluid,BALF）蛋白浓度，肺组织病理切片观察及评分。2.藏药多血康胶囊预防小鼠ALI的药效学观察。雄性昆明种小鼠120

5、只，﹣1分为空白组、模型组、地塞米松组（1mg·kg）、多血康高、中、低剂量组（3.6﹣1﹣1﹣1g·kg、1.8g·kg、0.9g·kg），每组20只。每日灌胃1次，空白组和模型组给﹣1予等体积生理盐水（10mL·kg），连续7天，第8天腹腔注射LPS造模。记录各组小鼠造模前后体重变化，外周血分类计数，测定肺组织含水量、肺毛细血管通透性、BALF蛋白浓度和中性粒细胞数，肺组织病理切片观察。3.藏药多血康胶囊对ALI小鼠Nr-f2信号通路的影响。雄性昆明种小鼠40﹣1只，按体重随机分为空白组、模型组、地塞米松组（1mg·kg）、多血康低剂量1万方数据

6、成都中医药大学2017届硕士论文﹣1组（0.9g·kg），每组10只，灌胃和造模同第二部分。检测肺组织超氧化物气化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）、丙二醛（MDA）浓度，RT-PCR技术测定醌氧化还原酶-1（NADPHquinoneoxidoreductase-1,NQO1）、血红素加氧酶-1（hemeoxygenase-1,HO-1）及谷氨酸半胱氨酸连接酶催化亚基重组蛋白（recombinantglutamatecysteineligase,catalytic,GCLC）mRNA表达水平，免疫荧光技术和Westernblot法测量N

7、r-f2蛋白核转移情况。4.藏药多血康胶囊对ALI小鼠NF-κB信号通路的影响。分组和造模同第三部分。Elisa法和Westernblot法检测小鼠血清肿瘤标志物α（TNF-α）、白介素6（IL-6）浓度和肺组织细胞粘附分子1（ICAM-1）、选择素E（CD62E）蛋白表达情况，同时采用RT-PCR技术测定其mRNA表达水平，免疫荧光技术和Westernblot法测量肺组织NF-κB通路IKK、P65蛋白表达情况。结果：1.LPS诱导ALI小鼠模型制作。空白组存活率为95%，气管滴注组存活率为35%，腹腔注射组存活率为100%。气管滴注组和腹腔注射组

8、肺含水量、BALF蛋白浓度、病理学评分均增加，病理切片提示大量炎症细胞浸润、肺泡间隔增宽和明显水肿。2.藏药