褪黑素和维生素e对早期糖尿病大鼠肾脏氧化应激的影响

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1、褪黑素和维生素E对早期糖尿病大鼠肾脏氧化应激的影响【关键词】糖尿病肾褪黑素维生素E氧化应激大鼠SparagueDaelatonin,MLT)是松果腺合成与分泌的主要激素之一，它又是一具有强有力抗氧化作用的自由基清除剂[3]。本研究采用维生素E和褪黑素治疗早期四氧嘧啶诱导的糖尿病大鼠，旨在探讨抗氧化剂保护糖尿病大鼠肾脏病变的具体机制。1材料和方法1.1材料1.1.1实验动物雄性SD大鼠38只,由东南大学实验动物中心提供，体质量170210g，23月龄，分笼饲养，实验动物室温度（22±2）℃，相对湿度

2、（50±5）%，光照/黑暗12h交替（06：00开灯，18：00关灯），环境安静，予普通饲料和清洁饮水。1.1.2药物及主要试剂褪黑素、维生素E和四氧嘧啶购自Sigma公司，超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSHPx)、丙二醛（MDA）、一氧化氮（NO）、葡萄糖测定试剂盒购自南京建成生物工程研究所。1.2方法1.2.1动物分组及处理大鼠适应性饲养3d后随机分为正常对照（NC）组（8只）和糖尿病（DM）组（30只）。糖尿病组大鼠予四氧嘧啶（临用前以生理盐水避光低温新鲜配制，质量浓度为4

3、0g·L-1）200mg·kg-1的剂量腹腔注射，3d后尾静脉采血测定血糖，以血糖大于16.8mmol·L-1确定为糖尿病模型，其中有24只大鼠成为糖尿病模型。糖尿病模型随机分为3组，每组8只：糖尿病对照（DMC）组；褪黑素治疗（DM+M）组，予褪黑素2mg·kg-1腹腔注射；维生素E治疗(DM+E)组，予维生素E100mg·kg-1腹腔注射。维生素E和褪黑素溶于含10%乙醇的生理盐水，正常对照组和糖尿病对照组大鼠予等体积（2ml·kg-1）含10%乙醇的生理盐水腹腔注射。每日17:00给药，持续给

4、药14d后处死。在实验过程中，DMC和DM+E组各有1只大鼠死亡。1.2.2标本收集处死前大鼠禁食12h，称取体质量，用1.5%戊巴比妥钠45mg·kg-1腹腔注射麻醉后，剖开胸腹腔，心脏穿刺采血，分离血清，测定血糖、甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）。迅速取出双肾，去包膜后称质量，取肾皮质0.4g在生理盐水冰浴下制成10%的组织匀浆，-70℃冻存待测MDA、NO含量和SOD、GSHPx活性。1.2.3观测指标及检测方法体质量：每周1次；饮水量：实验第7、8天，连续

5、2d记录每只大鼠的饮水量，取其平均值作为最终数据；肾脏湿质量：去包膜后用精密天平称质量；血清血糖：葡萄糖氧化酶法；TG、TC、BUN和Cr：美国BECKMAN公司全自动生化分析仪检测，TG和TC用酶法，BUN用电极法，Cr用苦味酸法；MDA、NO含量和SOD、GSHPx活性：采用比色法，操作严格按试剂盒说明书进行；匀浆组织蛋白浓度：采用考马斯亮蓝法。1.3统计学处理数据以x-±s表示，应用统计软件SPSS12.0行方差分析，组间比较采用q检验，P<0.05为差异有统计学意义。2结果2.1褪黑

6、素和维生素E对早期糖尿病大鼠一般情况及糖、脂代谢的影响实验中DMC、DM+M和DM+E组的动物死亡率分别为12.5%、0和12.5%。与NC组大鼠相比，DM组大鼠出现显著的多饮和体质量减轻的症状(P<0.01)；与DMC组大鼠比较，DM+M和DM+E组大鼠体质量下降有所改善，饮水量略有降低，以DM+M组为甚，但差异无统计学意义；DM组大鼠血糖较NC组明显升高（P<0.01），DM+M、DM+E和DMC组组间血糖相比差异无统计学意义；DMC组大鼠血清TC和TG组水平均明显上升，与NC组相比

7、差异有统计学意义（P<0.01）。与DMC组相比，DM+M和DM+E组TC和TG明显下降(均P<0.05)，DM+M组与DM+E组相比差异无统计学意义。见表1。2.2褪黑素和维生素E对早期糖尿病大鼠肾功能的影响与NC组大鼠相比，DMC组大鼠肾质量、肾质量/体质量明显增加（P<0.05,P<0.01），血清BUN和Cr显著升高(P<0.05,P<0.01)；DM+M组上述肾功能指标均有不同程度下降，与DMC组相比，肾质量、肾质量/体质量和BUN有显著性下降(分别为P

8、<0.05、P<0.01及P<0.05)；DM+E组肾质量、肾质量/体质量有所下降，但与DMC相比无显著性差异，BUN、Cr水平则无明显改变(均P>0.05)；DM+M组BUN与DM+E组相比有显著性下降(P<0.05)。表明褪黑素对早期四氧嘧啶诱导糖尿病大鼠有一定的肾保护作用，而维生素E无明显作用。见表2。表1褪黑素和维生素E对早期糖尿病大鼠一般情况及糖、脂代谢的影响(表2褪黑素和维生素E对早期糖尿病大鼠肾功能的影响与NC组比较，1）P