epo对早期糖尿病大鼠肾脏的保护作用

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1、EPO对早期糖尿病大鼠肾脏的保护作用【摘要】　　目的观察亚临床剂量EPO对糖尿病大鼠早期肾损伤的影响，并探讨其作用机制。方法将大鼠随机分为正常对照组(NC)、糖尿病组(DM)及糖尿病EPO干预的两个剂量亚组(DMTA和DMTB)。采用链脲佐菌素诱导1型糖尿病大鼠模型，腹腔注射EPO10周后，测定血糖、血压、血红蛋白、肾功能；光镜及电镜下观察肾组织形态学变化；免疫组化分析肾组织细胞凋亡相关蛋白Bcl2/Bax及细胞因子VEGF的表达。结果实验剂量EPO干预后，大鼠肾功能及其形态学指标得到显著改善；Bcl2/Bax比值及VEGF表达升高；均呈剂量依赖性

2、。血糖、血压、血红蛋白值与对照组相比无明显变化。结论亚临床剂量EPO可延缓早期糖尿病肾病发展进程，可能与上调Bcl2/Bax蛋白表达比值，抑制肾脏细胞凋亡有关；在本实验条件下，肾组织VEGF的表达上调未对糖尿病肾病造成不良影响。【关键词】糖尿病肾病；促红细胞生成素；细胞凋亡；Bcl2/Bax；血管内皮生长因子；大鼠　　ABSTRACT:ObjectiveTostudytheeffectofsubclinicaldosageofEPOonearlyrenallesionsofdiabeticrats.MethodsTheratslydividedi

3、ntonormalcontrolgroup(NC),diabeticgroup(DM),diabeticratstreatedorphologicalparameter,theexpressionofcellapoptosisassociatedproteinBcl2/BaxandVEGFeasured.ResultsAftertreatmentofEPO,renalfunctionalandmorphologicalindexesprovedsignificantlyandtheratioofBcl2/BaxandVEGFincreased,bo

4、thinadosedependentmanner.Bloodsugar,bloodpressureandhemoglobinconcentrationhadnosignificantdifferences.ConclusionSubclinicaldosageofEPOcouldplayanadvantageousroleindiabeticnephropathy.InhibitionofcellapoptosisbyupregulationofBcl2/Baxexpressionratemayberesponsibleforrenalprote

5、ctiveeffectsdespitetheupregulationofVEGF.　　KEY注射用重组人促红素(rebinanthumanerythropoietin,rhEPO，成都地奥九泓制药厂)，大鼠专用尿白蛋白放免试剂盒(天津九鼎医学生物工程有限公司，批内变异系数为3.1%-5.8%)，Bcl2多克隆抗体和Bax多克隆抗体(北京博奥森生物技术有限公司)，VEGF多克隆抗体(美国NeoMarkers公司)，EliVisonTMplus广谱试剂盒(福州迈新生物技术开发有限公司)，HITACHI7170自动生化分析仪(日本)，H600型透射式电子

6、显微镜(日本)，MoticImageAdvanced3.2高级图像处理软件。　　1.2造模方法与分组　　雄性SD大鼠(体重200-260g)44只，随机取10只作为正常对照(NC组)；余34只予腹腔注射STZ60mg/kg制备糖尿病模型，3d后测血糖>16.7mmol/L持续10d，确定为糖尿病模型制备成功[3]。成模率100%。将成模大鼠随机分为糖尿病非治疗组(DM组)12只；小剂量EPO干预组(DMTA组)11只，给予rhEPO30u/kg，每周3次腹腔注射；大剂量EPO干预组(DMTB组)11只，给予rhEPO50u/kg，每周3次腹腔注射

7、。以上干预剂量为亚临床剂量，对实验动物的血压和血红蛋白值均不产生显著影响，参考Yalcin[4]及Lee等[5]的研究，并由预实验获得。干预治疗10周后检测相应各项指标。期间，DM、DMTA、DMTB三组大鼠隔日注射鱼精蛋白锌胰岛素2u，以防止其血糖过高导致酮症酸中毒而死亡。实验结束时,死亡4只(DM组2只，DMTA及DMTB组各1只)，病死率12%，无自发缓解。　　1.3生化指标检测　　①代谢笼留取大鼠24h尿液，测定24h尿白蛋白排泄率(albuminexeretionrate,AER)和尿肌酐值；②大鼠称重后，10g/L戊巴比妥钠(按50mg/k

8、g体重)腹腔注射麻醉，右侧颈动脉插管测血压；③用肝素抗凝管收集0.5mL动脉血，测血糖、血红蛋