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1、天荔汤对糖尿病大鼠肾脏氧化应激的影响论文.freelalcontrolgroup.Alloxanodelofrats.After8easured.ThecontentofMDAandtherenalintrinsicanti-oxidatantenzymeactivitiessuchasSODandGSH-Pxalgroup,thelevelofbloodglucose,bloodlipid,urinaryproteinandtheratioofkidneyeemaycontributetothedevelopmentofdiabeticnephropathy.T
2、LTcanreverstheobovechanges.Keya公司产品,用0.9%氯化钠溶液低温(0～4℃)下溶解Alloxan,配成2%的浓度。配完后立即使用。722分光光度计,γ-自动免疫计数器,One-touchⅡ血糖仪、血糖试纸(美国强生公司产品),代谢笼,量筒,试管,天平,离心机。1.4造模、分组及给药从60只大鼠中随机取8只作为正常对照组,其余52只禁食24h后,分别按250mg/kg腹腔注射Alloxan,48h后测定动物禁食12h的空腹血糖,挑选血糖值在13～25mmol/L者为成模。实验中成模32只,成模后14d,确定为DN早期。成模大鼠32只按
3、血糖高低随机分为4组,每组8只,加正常对照组共为5组。天荔汤高剂量组：天荔合剂97.12g/(kg·d)灌胃；天荔汤低剂量组：天荔合剂48.65g/(kg·d)灌胃；西药组：优降糖1g/(kg·d)灌胃,卡托普利35.88g/(kg·d)灌胃；病理组、正常组：生理盐水10mL/(kg·d)灌胃。总疗程4周,实验过程中,除正常组外,各组均死亡1只,病理组死于高血糖引起的酮症酸中毒,西药组可能死于低血糖或撕咬致死。1.5标本采集与检测1.5.1血样处理实验结束,断头处死动物取血,一管用10%EDTA-Na260μL、抑肽酶80μL抗凝,低温4℃离心,3000r/min
4、,10min,分离血浆,-20℃保存,测内皮素(ET)用。另一管用5%肝素50μL抗凝,1000r/min离心10min,分离血浆,4℃保存。1.5.2肾脏动物处死后,立即取左侧肾脏,生理盐水冲洗,去包膜,准确称重,-80℃保存,检测超氯化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)用。临用时加生理盐水制成10%匀浆。精密扭力天平称取,精确度0.01g。1.5.3血糖葡萄糖氧化酶法,试剂盒,北京化工厂生产。1.5.4尿蛋白双缩脲法。1.5.5SOD邻苯三酚自氧化抑制法。1.5.6MDA硫代巴比妥酸反应产物比色法。1.6统计学方法实验数据均以x±s表示,组间差异采用t检验方
5、法,方差不齐用校正t’检验。2结果(见表1～表3)表1天荔汤对大鼠血糖、体重的影响(略)注：与病理组比较,*P0.05,**P0.01；与正常组比较,△P0.05,△△P0.01；与西药组比较,★P0.05,★★P0.01；与低剂量组比较,#P0.05(下同)。表2天荔汤对大鼠尿蛋白、肾重的影响(略)表3天荔汤对大鼠肾匀浆SOD、MDA的影响(略)3讨论糖尿病的动物造模方法较多,本实验用Alloxan造模,Alloxan可选择性地损害胰岛β细胞,其机理与自由基损伤有关。整个模型与人类1型糖尿病相近似。实验动物选用雄性SD大鼠,避免了性别对实验的影响。成模的标准取血
6、糖在13～25mmol/L者2,适宜用于DN早期的研究。糖尿病患者的脂质代谢异常早被注意,即葡萄糖不能被用作能源,代之以脂肪代谢。过度的脂肪代谢可以导致酮症酸中毒,严重者可致死亡。近来,肾组织细胞膜脂质过氧化和自由基损伤在DN早期中的作用日益受到重视。糖尿病时,肾组织处在高血糖、高血脂状态,以及由此引起的多元醇通路代谢异常和蛋白质非酶促糖基化,使体内自由基产生增多,清除自由基系统功能低下,加上组织缺血、缺氧等因素,致使肾脏氧化应激反应加强。产生的自由基首先攻击细胞膜,形成脂质过氧化物(LPO)；LPO能减少前列腺素的合成,降低抗凝血因子Ⅲ的活性,出现微循环障碍,进
7、一步加强过氧化损伤。MDA是LPO的降解产物,毒性更强,可以损伤膜上蛋白质如Na-K-ATPase,使其活性下降,也可损伤DNA,使核酸链断裂,使碱基与蛋白质之间交联,甚至引起细胞死亡。中药复方天荔汤承清代名医张锡纯论治消渴重视脾肾的观点,以调补脾肾、滋阴益气为主,兼施以祛痰活血通络为治。天荔汤中知母可促进横膈和脂肪组织对葡萄糖的摄取,女贞子、荔枝核、天花粉、黄芪均具降糖作用,天荔汤已被证实具有减轻糖尿病神经损伤作用3-4。天荔汤的整体疗效研究表明,其能促进胰岛素的分泌,其中的活血补肾中药可能对实验性DM胰岛细胞有保护作用,增加组织对胰岛素的敏感性。现代药理研究表
8、明,黄芪具
