活血化瘀中药复方诱导k562细胞凋亡论文

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1、活血化瘀中药复方诱导K562细胞凋亡论文郑瑾，刘强，王宗仁，李军昌，王文，马爱玲，马静，李晶华.freelinatingpoundontheproliferationandapoptosisofhumanchronicmyelocyticleukemiacelllineK562cells.METHODS:Livingcellsorphologyissionelectronmicroscopy.Floetry(FCM)inecellapoptosisquantitatively.RESULTS:Chineseherba

2、lpoundinhibitedtheproliferationofK562cells.TheapoptosisofK562cellsedbyFCMandtypicalultrastructuralchanges.Theapoptosisrateof100mlL-1drugserumlL-1drugserum(13.4%±1.3%vs7.6%±0.9%,P0.01).CONCLUSION:Chineseherbalpoundcaninhibittheproliferationofhumanchronicmyelocyt

3、icleukemiacelllineK562cellsandinducetheapoptosisofK562cells.【Keyinating;apoptosis;K562cell【摘要】目的：研究活血化瘀复方对人慢性粒细胞白血病细胞株K562细胞增殖、凋亡的影响.方法：通过台盼蓝拒染法活细胞计数，绘制细胞生长曲线.光镜、透射电镜观察细胞形态学变化.流式细胞检测定量观察细胞凋亡及其与药物的关系.结果：活血化瘀复方对K562细胞生长具有抑制作用，并且细胞呈现典型的凋亡形态学改变.流式细胞检测显示药物血清作用6h，K56

4、2细胞即已出现凋亡，100mLL-1含药血清组细胞凋亡率较50mLL-1含药血清组高(13.4±1.3)%vs(7.6±0.9)%,P0.01.结论：活血化瘀复方具有抑制白血病细胞生长，诱导白血病细胞凋亡的作用，从而为其临床应用提供了理论依据.【关键词】中药复方；活血化瘀；凋亡；K562细胞0引言慢性粒细胞白血病(CML)患者多有发热、贫血、乏力、衄血、肝脾肿大等症状，归属中医的“血症”、“虚劳”范畴，与瘀血有关,临床应用活血化瘀药物对CML治疗有较好疗效，患者生存质量提高［1］，但其作用机制少有报道.我们从细胞凋亡

5、角度探讨活血化瘀复方治疗CML的作用机制，为临床应用提供依据.1材料和方法1.1材料新西兰家兔,雄性，体质量(2.0±2.5)kg(第四军医大学动物实验中心提供).人CML细胞系K562细胞由唐都医院血液科实验室提供.活血化瘀复方由大黄6g,蛰虫6g,莪术12g,姜黄9g,三七9g,当归12g,黄芪30g,丹参12g,党参20g,.freelmunotech公司.新西兰家兔8只，分为2组，每组4只.实验组灌服活血化瘀复方制剂11gkg-1d-1，对照组灌服等量生理盐水，连续灌药10d，于最后一次灌药后2h颈动脉放血，

6、无菌分离血清，经56℃，30min灭活处理后，0.45μm微孔滤膜过滤除菌，-20℃冻存备用.K562细胞常规培养于含100mLL-1小牛血清的RPMI1640完全培养基(青霉素100UmL-1,链霉素100UmL-1,谷氨酸30μgmL-1)中,置CO2恒温培养箱(37℃,50mLL-1CO2,饱和湿度)中常规培养,2~3d传代1次.1.2方法取对数生长期细胞，去培养液.分三组处理：对照组加入含100mLL-1正常兔血清的RPMI1640培养液；实验组根据浓度又分为2组：100mLL-1含药血清组加入含100mLL

7、-1含药兔血清的RPMI1640培养液；50mLL-1含药血清组加入含50mLL-1含药兔血清+50mLL-1正常兔血清的RPMI1640培养液.调整细胞浓度为2×108L-1，继续培养不同时间，收集各组细胞,台盼蓝拒染法活细胞计数，绘制三组细胞生长曲线.另外含药血清作用后不同时间倒置显微镜下观察细胞形态变化.收集细胞,无菌PBS洗2次后离心涂片,2000XE透射电镜下观察.AnnexinVFITC/PI双标记法检测细胞早期凋亡操作按AnnexinVFITCKit说明书进行.各组细胞培养6h后收集，以冰冷的PBS洗涤

8、1次,4℃,500g离心5min,弃上清.再用冰冷的结合缓冲液重悬细胞，将其浓度调整为1×108~1×109L-1,取490μL上述细胞悬液，加AnnexinVFITC溶液及PI染液各5μL,使其终浓度分别为1.0，2.5mgL-1,混匀,避光冰浴10min后,每组分别取8个样本行流式细胞仪检测.统计学处理：采用SPSS10.0forLL-1;