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1、活血化瘀中药复方诱导K562细胞凋亡论文郑瑾,刘强,王宗仁,李军昌,王文,马爱玲,马静,李晶华.freelinatingpoundontheproliferationandapoptosisofhumanchronicmyelocyticleukemiacelllineK562cells.METHODS:Livingcellsorphologyissionelectronmicroscopy.Floetry(FCM)inecellapoptosisquantitatively.RESULTS:Chineseherba
2、lpoundinhibitedtheproliferationofK562cells.TheapoptosisofK562cellsedbyFCMandtypicalultrastructuralchanges.Theapoptosisrateof100mlL-1drugserumlL-1drugserum(13.4%±1.3%vs7.6%±0.9%,P0.01).CONCLUSION:Chineseherbalpoundcaninhibittheproliferationofhumanchronicmyelocyt
3、icleukemiacelllineK562cellsandinducetheapoptosisofK562cells.【Keyinating;apoptosis;K562cell【摘要】目的:研究活血化瘀复方对人慢性粒细胞白血病细胞株K562细胞增殖、凋亡的影响.方法:通过台盼蓝拒染法活细胞计数,绘制细胞生长曲线.光镜、透射电镜观察细胞形态学变化.流式细胞检测定量观察细胞凋亡及其与药物的关系.结果:活血化瘀复方对K562细胞生长具有抑制作用,并且细胞呈现典型的凋亡形态学改变.流式细胞检测显示药物血清作用6h,K56
4、2细胞即已出现凋亡,100mLL-1含药血清组细胞凋亡率较50mLL-1含药血清组高(13.4±1.3)%vs(7.6±0.9)%,P0.01.结论:活血化瘀复方具有抑制白血病细胞生长,诱导白血病细胞凋亡的作用,从而为其临床应用提供了理论依据.【关键词】中药复方;活血化瘀;凋亡;K562细胞0引言慢性粒细胞白血病(CML)患者多有发热、贫血、乏力、衄血、肝脾肿大等症状,归属中医的“血症”、“虚劳”范畴,与瘀血有关,临床应用活血化瘀药物对CML治疗有较好疗效,患者生存质量提高[1],但其作用机制少有报道.我们从细胞凋亡
5、角度探讨活血化瘀复方治疗CML的作用机制,为临床应用提供依据.1材料和方法1.1材料新西兰家兔,雄性,体质量(2.0±2.5)kg(第四军医大学动物实验中心提供).人CML细胞系K562细胞由唐都医院血液科实验室提供.活血化瘀复方由大黄6g,蛰虫6g,莪术12g,姜黄9g,三七9g,当归12g,黄芪30g,丹参12g,党参20g,.freelmunotech公司.新西兰家兔8只,分为2组,每组4只.实验组灌服活血化瘀复方制剂11gkg-1d-1,对照组灌服等量生理盐水,连续灌药10d,于最后一次灌药后2h颈动脉放血,
6、无菌分离血清,经56℃,30min灭活处理后,0.45μm微孔滤膜过滤除菌,-20℃冻存备用.K562细胞常规培养于含100mLL-1小牛血清的RPMI1640完全培养基(青霉素100UmL-1,链霉素100UmL-1,谷氨酸30μgmL-1)中,置CO2恒温培养箱(37℃,50mLL-1CO2,饱和湿度)中常规培养,2~3d传代1次.1.2方法取对数生长期细胞,去培养液.分三组处理:对照组加入含100mLL-1正常兔血清的RPMI1640培养液;实验组根据浓度又分为2组:100mLL-1含药血清组加入含100mLL
7、-1含药兔血清的RPMI1640培养液;50mLL-1含药血清组加入含50mLL-1含药兔血清+50mLL-1正常兔血清的RPMI1640培养液.调整细胞浓度为2×108L-1,继续培养不同时间,收集各组细胞,台盼蓝拒染法活细胞计数,绘制三组细胞生长曲线.另外含药血清作用后不同时间倒置显微镜下观察细胞形态变化.收集细胞,无菌PBS洗2次后离心涂片,2000XE透射电镜下观察.AnnexinVFITC/PI双标记法检测细胞早期凋亡操作按AnnexinVFITCKit说明书进行.各组细胞培养6h后收集,以冰冷的PBS洗涤
8、1次,4℃,500g离心5min,弃上清.再用冰冷的结合缓冲液重悬细胞,将其浓度调整为1×108~1×109L-1,取490μL上述细胞悬液,加AnnexinVFITC溶液及PI染液各5μL,使其终浓度分别为1.0,2.5mgL-1,混匀,避光冰浴10min后,每组分别取8个样本行流式细胞仪检测.统计学处理:采用SPSS10.0forLL-1;