输血传播病毒ttv致病性的探讨论文

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1、输血传播病毒TTV致病性的探讨论文.freelitledvirus;pathogenicity;hep-atitis，non-Atonon-E;polymerasechainreac-tion;sequenceanalysisAbstract:AIMTostudypathogenicityoftransfusiontrans-mittedvirus（TTV）andsequencepartofTTVDNAinXi’an.ToparepartialsequenceofTTVinXi’anyofMilitaryMedicalScienc

2、es，in-puterogeneity.METHODSAnestedpolymerasechainreaction（nested-PCR）assayersfromORF1ofTTVgenomesam-plesfrom119casesofnon-Atonon-Ehepatitispatientsand162casesofhealthyblooddonors.TheirALTandASTtoo.RESULTSTTVDNAfrom37of119（31.1%）non-Atonon-Ehepatitispatientsand30of162（

3、18.5%）healthyblooddonors.Thesetologyayhavepathogenici-ty，itcancauseacuteandchronichepatitis.TheresultsofparasonofthepartialsequenceofTTVinXi’anaybeneittedvirus）作为肝炎相关病毒被发现以来，对其致病性的研究一直是国内外TTV研究的焦点之一.虽然，众多学者进行了大量的研究，但是，至今TTV是否为肝炎病毒仍无较为明确的结论，我们通过对119例不明原因肝炎患者TTVDNA及肝功能检

4、测，并与我院健康有偿献血员TTVDNA检测对比，试图对TTV的致病性进行研究.1对象和方法1.1对象选择我院1998-01/2000-08住院与门诊及西京医院门诊非甲-非戊肝炎患者119（男83，女36）例;平均年龄（38±17）岁;将162（男46，女116）例有偿献血员经肝功能检测正常（ALT667nkatL-1，AST500nkatL-1），乙-丙型肝炎血清标志物检测均阴性，HIV抗体检测阴性者作为对照组.平均年龄（60±8）岁.对其中1例血清TTVDNA阳性的非甲-非戊型肝炎患者，将其TTV套式PCR检测终产物纯化测序，用

5、DNAsis软件在计算机上与军事医学科学院王海涛报道的中国1株（BDH1，GenBank注册号AF116842）进行序列同源性比较.肝功能检测方法:全自动肝功能检测仪自动检测肝功.TaqDNA聚合酶、2.5mmolL-1dNTPs，DNA分子质量标准、肝炎系列标记物检测试剂盒均为华美公司生产，QIAEXⅡPCR产物纯化试剂盒为德国QIAGEN公司生产，琼脂糖上海东海制药厂生产，PCR扩增仪为美国PE公司生产的PE2400型PCR扩增仪，DNA全自动测序仪由美国ABI公司生产.1.2方法取血清20μL，置于Ependoph管中，加入

6、20μL（等体积）的裂解液，置沸水中加热10min，高速离心（80g，10min），取上清备用.引物设计用于TTVDNA检测的引物，参照文献［1］报道的引物序列设计，由西安美联公司合成（Tab1）.引物合成后以无离子水稀释至2.5mmolL-1的应用浓度.表1TTVDNA套式PCR扩增引物序列略套式PCR（nested-PCR）扩增方法文献［2］并做适当的修改，第1次取标本离心上清2μL做DNA模板，第2轮以第1轮产物2μL做模板，两次PCR反应体积均为15μL，含2.5mmolL-1dNTPs1μL，2.5μmolL-1浓度引物

7、各1μL（第1轮为两外引物，第2轮为两内引物），Taq酶1.5U，10×Taq酶buffer1.5μL.顶部以石蜡油封闭.以PE公司生产的PE-2400型PCR仪自动循环，均按下列参数循环:94℃30s，56℃30s，72℃30s，共35个循环.开始循环前94℃预变性5min，最后72℃延伸5min.PCR终产物经15gL-1琼脂糖凝胶电泳，溴化乙锭染色，紫外线检测仪观察结果.当观察到197bp的扩增DNA条带时判为TTVDNA检出阳性（Fig1）.每次检测均设阳性与阴性对照.从低熔点凝胶中切下阳性条带，用QIAEX纯化试剂盒按说

8、明步骤进行纯化，送我校中心实验室以自带引物直接测序法测序，所用内引物对应的TTVDNA位置为nt2061～2080和nt2238～2257，预计靶基因全长197bp.图1略2结果非甲-非戊肝炎组及健康有偿献血员组TTVDNA检测结果（Tab2），非