三氧化二砷对人大肠癌细胞生长及其端粒酶活性的影响论文

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1、三氧化二砷对人大肠癌细胞生长及其端粒酶活性的影响论文【关键词】三氧化二砷TheInfluenceofArsenicTrioxideontheGroeraseActivityofHumanLargeIntestineCarcinomaCellsAbstract：ObjectiveTostudytheinfluenceofarsenictrioxideonthegroeraseactivityofhumanlargeintestinecarcinomacelllines.MethodsTheinfluenceofgroanlargeintes

2、tinecarcinomacelllinesLoVoandCoLo320inducedbyAs2O3injectionethod,Trypanbluemethod,3(4,5dimethylthiazole2yl)2,5diphenyltetrazoliumbromide(MTT)assay.Telomeraseactivityofthecarcinomacellseasuredbythemethodofrepeatampliticationprotocol(TRAP)biningidegelelectrophosis(PA

3、GE)silverstainingmethodbeforeandafterthetreatmentanlargeintestinecarcinomacelllinesLoVoandCoLo320.AlsothetolemeraseactivityofLoVoandCoLo320treatedbyAs2O3injectionedependentrelationship.ConclusionAs2O3hassignificantinhibitioneffectonthehumanlargeintestinecarcinomacellli

4、nes,aybecloselyrelatedtoAs2O3'sinhibitingeffectonthecarcinomacelltolemeraseactivity.Keya;CellLines;ArsenicTrioxide;Tolemerase摘要：目的探讨三氧化二砷（As2O3）注射液对人类大肠癌细胞生长及其端粒酶活性的影响。方法采用活细胞观察法、台盘兰拒染法和四甲基偶氮唑蓝比色（MTT）法，严密观察As2O3注射液对人大肠癌细胞株LoVo和CoLo320生长的影响；应用端粒重复序列扩增法（TRAP）—聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAG

5、E）银染法检测As2O3注射液处理前、后大肠癌细胞端粒酶活性的变化。结果As2O3注射液能够显著地抑制LoVo和CoLo320细胞株的生长，并对癌细胞的端粒酶活性具有明显的抑制作用，该作用呈现出一定的浓度和时间依赖性。结论As2O3注射液的确对于人大肠癌细胞株的生长具有显著的抑制作用，该作用可能与As2O3注射液能够抑制癌细胞的端粒酶活性密切相关。关键词：大肠癌；三氧化二砷；细胞株；端粒酶0引言三氧化二砷（As2O3）是剧毒中药砒霜的有效成分,自20世纪70年代以来，我国学者率先研制成功As2O3注射液，用于治疗急性早幼粒细胞白血病(A

6、PL)，取得了世人瞩目的突破进展15。近年来.freela公司,TaqDNA多聚酶购于Promega公司。聚丙烯酰胺为EMERCK公司产品。1.3细胞培养将LoVo和CoLo320细胞株接种于无菌培养瓶中，加入含小牛血清、青链霉素的培养液，于培养箱中培养，细胞呈单层贴壁生长，每3～4d传代一次。1.4活细胞观察在培养状态下,在倒置显微镜下观察细胞用药前后生长状况及其形态学改变。1.5台盘兰拒染法检测细胞增殖率癌细胞悬液以2×107/L浓度接种于40孔细胞培养板中，待细胞贴壁后分别加入不同浓度的As2O3注射液,对照孔加培养液,.fr

7、eelin,显微镜下计算出拒染的活细胞数,按下式计算细胞增殖率:细胞增殖率=(给药组平均活细胞数/对照组平均活细胞数)×100%1.6MTT法检测细胞增殖率将浓度为2×107/L癌细胞接种于40孔细胞培养板中，待细胞贴壁后分别加入不同浓度的As2O3注射液,对照孔加培养液,培养至预定时间，每孔加入MTT,继续培养4h,加盐酸异丙醇,于酶联仪波长570nm处测出各孔吸光度值(A值),按下式计算细胞增殖率:细胞增殖率=(给药孔平均A值/对照孔平均A值)×100%1.7端粒酶活性的检测将对数生长期癌细胞制成细胞悬液，取细胞悬液3.6ml（含1×

8、106个细胞）接种培养瓶中，待细胞贴璧后加入不同浓度的As2O3注射液，作用48～120h后收集细胞备用。取阳性对照细胞悬液（含1×106个细胞），接种于培养瓶中，培养48h后收集细胞备用。细