早期高压氧治疗对颅脑损伤神经细胞凋亡的影响

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1、早期高压氧治疗对颅脑损伤神经细胞凋亡的影响：刘勇，陈向林，朱玉辐，燕景峰，孔令胜，冯军，胡小兵【摘要】目的通过研究早期高压氧治疗对大鼠颅脑损伤后相关基因Bcl-2、Bax表达影响,探讨其对损伤神经细胞的早期保护作用。方法清洁级SD大鼠100只，随机分为正常组（Nor）20只、创伤组（TBI）40只、高压氧治疗组（HBOT）40只。采用Allen′s改良法建立大鼠自由落体脑损伤模型，在损伤6h内予以高压氧治疗。伤后8h及1、3、5、8天处死动物取材，苏木精-伊红染色观察细胞形态学变化，流式细胞仪检测各观察点细胞凋亡率，

2、免疫组织化学染色方法检测皮质及海马细胞中Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果HBOT组各时点皮质及海马细胞均较TBI组形态规则、排列整齐，而且层次较多，胞核浓染、固缩的现象明显减少。与TBI组相比，HBOT组各时点的细胞凋亡率均显著下降（P<0.05）。HBOT组各时点Bcl-2表达强度均较TBI组增强（P＜0.05，P<0.01）,Bax表达强度均较TBI组显著降低（P＜0.01）。结论早期高压氧治疗能明显促进颅脑损伤后Bcl-2的高表达，抑制Bax的表达，能有效抑制颅脑损伤后细胞凋亡。【关键词】脑损伤；

3、早期；高压氧；Bcl-2;Bax；细胞凋亡Abstract:ObjectiveToinvestigatetheeffectsofearlyhyperbaricoxygenationtreatment(HBOT)ontheexpressionofapoptosisgenesBcl-2andBaxfolloechanism.Methods100Sprague-Daalgroup(20rats),TBIgroup(40rats),HBOTgroup(40rats).BasedupontheFeeney′smodelofmo

4、difiedAllen′smethod,experimentalanimalsalspuscellsorphologicalchangesbyH-Estaining;theapoptosisrateofinjuredhippocampuscortexetry;andtheexpressionofproteinBcl-2andBaxmunohistochemicalstaining.ResultsH-Estainingindicatedthat,incontrasttoTBIgroup,inHBOTgroupthehi

5、ppocampuscortexandthehippocampuscellsatappropriatetimeshadregularmorphology,orderlyarrangementandmorestrataldistributions,arkeddecreaseinapoptosisrateofhippocampuscells(P<0.05orP<0.01);increasedexpressionofBcl-2inHBOTgroup(P<0.05)andsignificantlydecrea

6、sedexpressionofBax(P<0.01).ConclusionTheearlyHBOTcanpromoteBcl-2expressionandinhibitBaxexpression,，钻开骨窗，直径约5mm，保持硬脑膜完整。采用Allen′s改良法［3］致伤造成右颞顶叶的脑挫裂伤，用骨蜡封闭骨窗，缝合切口。动物无死亡，左侧轻度偏瘫。1.3高压氧治疗HBOT组大鼠致伤6h内，使用Y-C14+4型改良动物实验舱进行高压氧治疗。治疗过程为：将动物置于80cm×45cm×40cm的特制木箱（连接给氧装置）

7、内，木箱置于国产双舱四门式加压舱内，随即用压缩空气加压，升压时间20min,升压10min时开始向木箱内充氧气（纯氧供给，高压氧操作系统控制充氧过程），压力升至200kPa后稳压，在该压力下继续持续充氧30min，停止充氧10min，之后再次向木箱内充氧30min，然后等速减压20min，出舱。开始升压时，大鼠活跃，随即安静，给氧约40min后大鼠又表现活跃和兴奋，无抽搐和死亡。舱内温度18～24℃。1.4组织病理学检查于规定的不同时间点，在深麻醉下开胸，暴露心脏，先快速（约10min）灌注生理盐水约150ml，冲净

8、血液，再以4℃10%多聚甲醛液350ml灌注，完毕即开颅取脑，立即置于4℃10%多聚甲醛液中后固定6h,以脑挫伤组织为中心做冠状3.5mm厚切片，常规脱水、石蜡包埋，片厚5μm连续冠状切片3～4套，贴于备好的载玻片上，放于烘干机上烤12h，分别进行苏木精－伊红染色、免疫组化染色，镜下观察皮质及CA1、CA3区细胞和灰度值。1.5流式细胞仪检测细