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时间:2018-07-07
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1、黄药子配伍当归快速测定色谱指纹图谱论文【摘要】目的建立黄药子配伍当归快速测定(HPLC/PDA/MS)色谱指纹图谱。方法应用KromasilC18柱,0.1%乙酸水与纯色谱甲醇进行梯度洗脱,流速为0.8ml/min,检测波长200~400nm,柱温为30℃。结果得到分离度、重现性均较好的黄药子配伍当归HPLC/PDA指纹图谱,标示了10个共有峰。应用HPLC/MS技术对其6个主要色谱峰进行了初步归属。结论黄药子配伍当归指纹图谱的建立,为其吸收/代谢前后的活性/毒性变化情况提供了依据。【关键词】黄药子配伍当归;指纹图谱;快速测定Abstract:ObjectiveToestabli
2、shthechromatographicfingerprintsofDioscoreabulbiferaL.andAngelicasinensisDielsbyHPLC/PDA.MethodsSeparationasilC18column.Gradienteluteedbythemobilephaseconsistingof0.1%aceticacidandcolourspectrummethanoll/min.Thecolumntemperature.ResultsPerfectfingerprintsonpeaksedinfingerprints.Sixpoundsethod
3、canbeappliedforinternalabsorptionandinternalmetabolismofDioscoreabulbiferaL.andAngelicasinensisDiels.Keybelliferae)当归AngelicasinensisDiels的根。2方法2.1供试品溶液的制备黄药子配伍当归(1∶2)饮片头煎10倍量水,浸泡2h后,煎煮1h,二煎8倍量水,煎煮1h,合并煎液,浓缩,超速离心机8000r·min-1离心3h,继续浓缩至每毫升含生药材0.5g,冷冻干燥制成颗粒。给药时用蒸馏水溶解稀释至所需浓度,0.45μm微孔滤膜滤过,即得。2.2参照
4、物溶液的制备取阿魏酸对照品适量,用70%甲醇溶解,制成浓度为100μg/ml的溶液,取黄独乙素对照品适量,用甲醇溶解,制成浓度为312μg/ml的溶液,取(+)表儿茶素对照品适量,用甲醇溶解,制成浓度为100μg/ml的溶液,取金丝桃苷对照品适量,用甲醇溶解,制成浓度为200μg/ml的溶液。2.3色谱条件及测定方法色谱柱:KromasilC18柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相0.1%乙酸水(A)与甲醇溶液(B);梯度洗脱:0~50min(0~17%A),50~90min(17%A~40%A),90~115min(40%~80%A);115~135min(80%~10
5、0%A);135~145min(100%A);流速:0.8ml/min;检测波长:280nm;PDA同时纪录200~400nm紫外光谱,柱温:30℃;柱后分流0.2ml/min进质谱仪,同时记录总离子流(TIC)图。离子极性::ESI(+)ESI(-);扫描范围:100~800;干燥气流速:10L/min;干燥气温度:350℃;雾化室压:40pis;毛细管电压:4000V;传输电压:70eV;进样量10μl。2.4方法学考察2.4.1空白实验吸取50%甲醇10μl,注入高效液相色谱仪,记录色谱图,结果表明空白溶剂无干扰。2.4.2参照物实验吸取参照物溶液10μl,注入高效液相色谱
6、仪,记录色谱图,其主峰的保留时间用于确定黄药子配伍当归中各对照品的峰位。2.4.3稳定性实验取同一供试品溶液,分别于0,1,2,4,12,24h进样检测。各主要色谱峰的相对保留时间和相对峰面积比值的RSD均小于3%,表明样品至少在24h内稳定。2.4.4进样精密度实验取同一供试品溶液,连续进样6次。各主要色谱峰的相对保留时间和相对峰面积比值的RSD均小于3%,表明精密度良好。2.4.5重复性实验取同一批药材,按“2.1”项下方法分别制备供试品溶液6份,进样检测。各主要色谱峰的相对保留时间和相对峰面积比值的RSD均小于3%,表明方法的重复性好。3结果黄药子配伍当归高效液相色谱可以分
7、离出20个左右的峰,经比较所有测定的色谱图,从中选择了稳定性和重现性均较好的10个共有峰构成了指纹图谱的特征峰群(见图1)。为进一步研究指纹图谱中各谱峰归属,利用HPLC/MS技术,对黄药子配伍当归供试品进行了质谱正负离子检测(见图2)。4讨论4.1HPLC/PDA/MS分析HPLC/PDA对照品实验表明,5号峰是(+)儿茶素,与对照品保留时间和光谱图最大吸收波长一致,根据TIC图提取质谱图(图3)中表现为m/z289[M-H]-;6号峰是阿魏酸,与对照品保留时间和光谱图最大吸收
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