黄药子配伍当归快速测定色谱指纹图谱论文

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1、黄药子配伍当归快速测定色谱指纹图谱论文【摘要】目的建立黄药子配伍当归快速测定（HPLC/PDA/MS）色谱指纹图谱。方法应用KromasilC18柱，0.1%乙酸水与纯色谱甲醇进行梯度洗脱，流速为0.8ml/min，检测波长200～400nm，柱温为30℃。结果得到分离度、重现性均较好的黄药子配伍当归HPLC/PDA指纹图谱，标示了10个共有峰。应用HPLC/MS技术对其6个主要色谱峰进行了初步归属。结论黄药子配伍当归指纹图谱的建立，为其吸收/代谢前后的活性/毒性变化情况提供了依据。【关键词】黄药子配伍当归；指纹图谱；快速测定Abstract：ObjectiveToestabli

2、shthechromatographicfingerprintsofDioscoreabulbiferaL.andAngelicasinensisDielsbyHPLC/PDA.MethodsSeparationasilC18column.Gradienteluteedbythemobilephaseconsistingof0.1%aceticacidandcolourspectrummethanoll/min.Thecolumntemperature.ResultsPerfectfingerprintsonpeaksedinfingerprints.Sixpoundsethod

3、canbeappliedforinternalabsorptionandinternalmetabolismofDioscoreabulbiferaL.andAngelicasinensisDiels.Keybelliferae)当归AngelicasinensisDiels的根。2方法2.1供试品溶液的制备黄药子配伍当归（1∶2）饮片头煎10倍量水，浸泡2h后，煎煮1h，二煎8倍量水，煎煮1h，合并煎液，浓缩，超速离心机8000r·min-1离心3h，继续浓缩至每毫升含生药材0.5g，冷冻干燥制成颗粒。给药时用蒸馏水溶解稀释至所需浓度，0.45μm微孔滤膜滤过，即得。2.2参照

4、物溶液的制备取阿魏酸对照品适量，用70%甲醇溶解,制成浓度为100μg/ml的溶液,取黄独乙素对照品适量，用甲醇溶解，制成浓度为312μg/ml的溶液，取（+）表儿茶素对照品适量，用甲醇溶解，制成浓度为100μg/ml的溶液,取金丝桃苷对照品适量，用甲醇溶解，制成浓度为200μg/ml的溶液。2.3色谱条件及测定方法色谱柱：KromasilC18柱(250mm×4.6mm，5μm)；流动相0.1%乙酸水(A)与甲醇溶液(B)；梯度洗脱：0～50min(0～17%A)，50～90min(17%A～40%A),90～115min(40%～80%A)；115～135min(80%～10

5、0%A)；135～145min(100%A)；流速：0.8ml/min；检测波长：280nm；PDA同时纪录200～400nm紫外光谱，柱温：30℃；柱后分流0.2ml/min进质谱仪，同时记录总离子流(TIC)图。离子极性:：ESI（+）ESI（-）；扫描范围:100～800；干燥气流速：10L/min；干燥气温度：350℃；雾化室压：40pis；毛细管电压：4000V；传输电压：70eV；进样量10μl。2.4方法学考察2.4.1空白实验吸取50%甲醇10μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，结果表明空白溶剂无干扰。2.4.2参照物实验吸取参照物溶液10μl，注入高效液相色谱

6、仪，记录色谱图，其主峰的保留时间用于确定黄药子配伍当归中各对照品的峰位。2.4.3稳定性实验取同一供试品溶液，分别于0，1，2，4，12，24h进样检测。各主要色谱峰的相对保留时间和相对峰面积比值的RSD均小于3%，表明样品至少在24h内稳定。2.4.4进样精密度实验取同一供试品溶液，连续进样6次。各主要色谱峰的相对保留时间和相对峰面积比值的RSD均小于3%，表明精密度良好。2.4.5重复性实验取同一批药材，按“2.1”项下方法分别制备供试品溶液6份,进样检测。各主要色谱峰的相对保留时间和相对峰面积比值的RSD均小于3%,表明方法的重复性好。3结果黄药子配伍当归高效液相色谱可以分

7、离出20个左右的峰，经比较所有测定的色谱图,从中选择了稳定性和重现性均较好的10个共有峰构成了指纹图谱的特征峰群(见图1)。为进一步研究指纹图谱中各谱峰归属，利用HPLC/MS技术，对黄药子配伍当归供试品进行了质谱正负离子检测（见图2）。4讨论4.1HPLC/PDA/MS分析HPLC/PDA对照品实验表明，5号峰是（+）儿茶素，与对照品保留时间和光谱图最大吸收波长一致，根据TIC图提取质谱图（图3）中表现为m/z289［M-H］-；6号峰是阿魏酸，与对照品保留时间和光谱图最大吸收