当归补血汤有效部位指纹图谱归属分析

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1、当归补血汤有效部位指纹图谱归属分析王庆敏李晓宁王兵梁逸曾黄晔【摘要】目的分析当归补血汤的石油醚、氯仿、醋酸乙酯、正丁醇部位的特征峰在复方全方及在单味药中的归属。方法采用高效液相色谱法，色谱柱为Shim-PackVP-ODS柱，250mm×4.6mmI.D.，流动相为甲醇-水（梯度洗脱），检测波长为280nm，流速为1ml/min。结果复方石油醚部位的9个特征峰5个来自当归,4个来自黄芪；氯仿部位的9个特征峰6个来自黄芪，3个来自当归；醋酸乙酯部位的11个特征峰，7个同时来自当归和黄芪，1个来自当归，3个来自黄芪；正丁醇部

2、位的7个特征峰，6个同时来自于当归和黄芪,1个来自黄芪。结论复方各部位的指纹图谱为阐明各部位的药效物质基础提供科学依据，为下一步的临床应用以及新药的开发提供参考。【关键词】当归补血汤单味药有效部位指纹图谱高效液相色谱中药有效部位可以在保留原方治疗优点的基础上提高中药的作用强度、临床药效以及质量控制水平，改变传统中药大、黑、粗外观形象，是中药研究的又一新的发展点〔1〕，是研发中药二类新药依据〔2，3〕，也是从中药开发新药的第3条途径〔4〕。王明军等〔5〕论述了中药有效部位研究的现状、方法和手段，并阐明用中药指纹图谱对中药提

3、取物进行质量控制。当归补血汤为中医经典名方之一，始载于李东垣的《内外伤辨惑论》,按黄芪∶当归=5∶1组成，具有补气生血等功效。对该复方的HPLC及GCMS实验研究表明当归补血汤成分极其复杂〔6，7〕；根据模型不同，不同部位可用于不同疾病的治疗〔8，9〕，对该复方某部位指纹图谱的研究也有报道〔10～12〕。为获得当归补血汤各部位更全面的信息，本文建立了当归补血汤的石油醚、氯仿、醋酸乙酯、正丁醇部位的指纹图谱，并找到了这些部位的特征峰在复方全方及在单味药中的归属,为各部位的药效物质基础的阐明提供科学依据。1仪器与试药Agi

4、lent1100系列高效液相色谱仪（美国Agilent公司）；G1315A型二极管阵列检测器。当归购自甘肃岷县，黄芪购自长沙九之堂药店，经湖南省中医药研究院中药研究所鉴定。阿魏酸与芒柄花素对照品（中国药品生物制品检定所提供），甲醇为色谱纯,水为二次去离子水，其余试剂为分析纯。2方法与结果2.1色谱条件ShimPackVPODS柱，4.6mm×250mmI.D.，流动相组成：A相（H2O）和B相（CH3OH），B相的体积分数在0～10min为1%～25%，10～20min为25%～50%，20～30min为50%～70

5、%，30～50min为70%～90%；流速1.0ml/min；柱温为室温25℃；检测波长280nm。2.2供试品溶液的制备2.2.1当归补血汤复方全方的制备称取黄芪和当归粉末（过40目筛）各8g，1.6g，加8倍量和6倍量70%的乙醇，分别回流提取2h和1h，将所得醇提物蒸干，残渣加甲醇溶解定容到25ml。2.2.2当归补血汤复方及单味药各有效部位的提取复方有效部位的提取：分别称取黄芪和当归粉末（过40目筛）各20，4g，加8倍量和6倍量70%的乙醇，分别回流提取2h和1h，将所得醇提物蒸干，残渣均匀分散于48ml水中，

6、使其含量为0.5g药材/ml，水溶液依次用同体积石油醚、氯仿、醋酸乙酯，正丁醇各萃取3次，各部位提取液蒸干，残渣加甲醇溶解定容到10ml，即为复方的石油醚、氯仿、醋酸乙酯、正丁醇部位。单味药的有效部位的提取：分别称取黄芪、当归粉末（过40目筛）各20，4g，同法操作，制备单味药黄芪，当归的相应部位。2.3精密度实验取“2.2.1”项下样品20μl，按拟定方法连续进样6次，用“中药指纹图谱相似度计算软件”计算，所得相似度为0.9975，0.9962，0.9976，0.9951，0.9880，0.9975，相似度极高，说明供

7、试品进样精密度良好。2.4重复性实验按“2.2.1”项下方法，平行实验5次，分别取20μl，按拟定方法进样，用“中药指纹图谱相似度计算软件”计算，所得相似度为0.9542，0.9932，0.9958，0.9943，0.9911，相似度极高，说明方法的重复性良好。2.5稳定性实验取同一复方供试液20μl分别在0，6，12，24，48h进样5次的，用“中药指纹图谱相似度计算软件”计算，所得相似度为0.9820，0.9929，0.9838，0.9967，0.9942，相似度极高，说明48h内供试品溶液稳定性较好。结果表明样品指

8、纹图谱各色谱峰相对迁移时间和峰面积基本一致，相似度较高，符合指纹图谱研究的技术要求。2.6供试品溶液的检测取上述样品各20μl，分别进样，阿魏酸、芒柄花素、复方全方及复方单味药各部位的HPLC指纹图谱见图1～6。主要特征峰峰面积百分含量见表1。表1样品主要特征峰峰面积相对百分含量3讨论从图2可以看出复方成分复杂，对响