当归补血汤有效部位指纹图谱归属分析论文

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1、当归补血汤有效部位指纹图谱归属分析论文王庆敏李晓宁王兵梁逸曾黄晔【摘要】目的分析当归补血汤的石油醚、氯仿、醋酸乙酯、正丁醇部位的特征峰在复方全方及在单味药中的归属。方法采用高效液相色谱法，色谱柱为Shim-PackVP-ODS柱，250mm×4.6mmI.D.，流动相为甲醇-水（梯度洗脱），检测波长为280nm，流速为1ml/min。结果复方石油醚部位的9个特征峰5个来自当归,4个来自黄芪；氯仿部位的9个特征峰6个来自黄芪，3个来自当归；醋酸乙酯部位的11个特征峰，7个同时来自当归和黄芪.freelPackVPODS柱，4.6mm×250mmI.D.，流动相组成：A相（H2O）和B相（CH

2、3OH），B相的体积分数在0～10min为1%～25%，10～20min为25%～50%，20～30min为50%～70%，30～50min为70%～90%；流速1.0ml/min；柱温为室温25℃；检测波长280nm。2.2供试品溶液的制备2.2.1当归补血汤复方全方的制备称取黄芪和当归粉末（过40目筛）各8g，1.6g，加8倍量和6倍量70%的乙醇，分别回流提取2h和1h，将所得醇提物蒸干，残渣加甲醇溶解定容到25ml。2.2.2当归补血汤复方及单味药各有效部位的提取复方有效部位的提取：分别称取黄芪和当归粉末（过40目筛）各20，4g，加8倍量和6倍量70%的乙醇，分别回流提取2h和1h，

3、将所得醇提物蒸干，残渣均匀分散于48ml水中，使其含量为0.5g药材/ml，水溶液依次用同体积石油醚、氯仿、醋酸乙酯，正丁醇各萃取3次，各部位提取液蒸干，残渣加甲醇溶解定容到10ml，即为复方的石油醚、氯仿、醋酸乙酯、正丁醇部位。单味药的有效部位的提取：分别称取黄芪、当归粉末（过40目筛）各20，4g，同法操作，制备单味药黄芪，当归的相应部位。2.3精密度实验取“2.2.1”项下样品20μl，按拟定方法连续进样6次，用“中药指纹图谱相似度计算软件”计算，所得相似度为0.9975，0.9962，0.9976，0.9951，0.9880，0.9975，相似度极高，说明供试品进样精密度良好。2.4重

4、复性实验按“2.2.1”项下方法，平行实验5次，分别取20μl，按拟定方法进样，用“中药指纹图谱相似度计算软件”计算，所得相似度为0.9542，0.9932，0.9958，0.9943，0.9911，相似度极高，说明方法的重复性良好。2.5稳定性实验取同一复方供试液20μl分别在0，6，12，24，48h进样5次的，用“中药指纹图谱相似度计算软件”计算，所得相似度为0.9820，0.9929，0.9838，0.9967，0.9942，相似度极高，说明48h内供试品溶液稳定性较好。结果表明样品指纹图谱各色谱峰相对迁移时间和峰面积基本一致，相似度较高，符合指纹图谱研究的技术要求。2.6供试品溶液的

5、检测取上述样品各20μl，分别进样，阿魏酸、芒柄花素、复方全方及复方单味药各部位的HPLC指纹图谱见图1～6。主要特征峰峰面积百分含量见表1。表1样品主要特征峰峰面积相对百分含量3讨论从图2可以看出复方成分复杂，对响应值较大的21个峰编号分析，经阿魏酸与芒柄花素标准品（浓度均为500μg/ml）对照，确认峰7为当归中阿魏酸，峰18为黄芪中芒柄花素。此外，通过解析得到的光谱与文献［13，14］对照（王平《黄芪当归复方的指纹图谱及对兔肝纤维化的药理药效研究》中南大学中药现代化研究中心），对另外5个峰初步定性为：峰9：毛蕊异黄酮苷；峰14：毛蕊异黄酮；峰16：（3R)-7,2'-Dihydroxy-

6、3',4'-dimethoxyisoflavan;峰19：Z-藁苯内酯；峰20：E-藁苯内酯。3.1对复方及单味药的石油醚部位的谱图分析从图3中可以看出复方的石油醚部位的9个特征峰，4个来自黄芪，5个来自当归，即峰14，15，16，18来自黄芪，峰22，17，19，20，21来自当归，以20号峰（当归中E-藁苯内酯）峰值最大为主要特征，从表1看出其峰面积百分含量为54.61%，表明该部位提取出的是极性很小的脂溶性物质。该部位中峰22在复方全方中没找到，可能是由于浓度原因：提取复方全方时，取9.6g药材提取液蒸干后，为保证残渣的完全溶解，用甲醇溶解定容到25ml；而在提取有效部位时，取24克药材

7、提取蒸干，石油醚萃取残渣水溶液后，石油醚液蒸干，残渣用甲醇溶解定容到10ml，依此计算石油醚部位浓度是全方的6.25倍，浓度的增大使复方全方中没检测到的峰22在石油醚部位中出现。3.2对复方及单味药的氯仿部位的谱图分析从图4可以看出，复方氯仿部位的9个特征峰，6个来自黄芪，3个来自当归，即峰3，9，14，15，16，18来自黄芪，峰7，11，12来自当归。从表1中看出该部位是14号峰（黄芪中毛蕊异