中药色谱指纹图谱方法学薄层色谱.ppt

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1、2.薄层色谱操作规程可选择可选择系统适用性试验检测限比移值(Rf)分离度自动多次展开全自动定量点样薄层指纹图谱报告◆简单操作组合供试品溶液制备手工半定量点样玻璃双槽展开箱展开显色直观观测(可见光及紫外光)判断样品指纹谱相似度拍摄色谱图像照片记录◆复杂操作组合供试品溶液制备计算机控制半自动或全自动定量点样玻璃双槽展开箱展开或自动展开箱展开显色直观观测(可见光及紫外光)拍摄色谱图像照片记录数码成像及数据处理薄层扫描-积分数据计算机相似度评价3.薄层色谱的规范化(1)器材的规范化固液萃取小柱；定量微升毛细管；标准展开箱或双槽展开箱

2、；预制薄层板；展开条件控制槽；紫外光灯；显色喷雾器或浸渍显色用玻璃缸；薄层色谱扫描仪。半自动薄层点样器；计算机控制、参数可与薄层扫描仪共享的全自动薄层点样器；自动展开箱；薄层色谱成像及图像处理系统。(2)操作规程的规范化点样——展开——显色(3)供试品溶液的预处理“杂质”——对待测的活性成分或指标成分形成干扰。不经预处理，很难得到清晰明确的结果。例方法：A.加热回流B.超声提取C.液液萃取D.固液萃取——样品的提取液通过固相小柱处理。吸附、键合相分配、正相、反相、离子对、离子交换原理富集待测组分，去除部分杂质。如雪莲花,甲醇

3、提取液，不经净化处理，色谱的可见光或荧光图像与经预处理(Ｃ18小柱洗脱)的图像比较，很显然经过预处理将杂质去除后色谱图像质量明显提高。(4)展开溶剂的选择展开剂———薄层色谱的关键展开剂优化———依靠经验展开剂要求———分离度高，斑点多。展开剂最优化模式难以计算：（1）样品中多类别成分共存，优化模式难以外延。（2）溶剂蒸气在展开中起着举足轻重作用，但又难以获得可测量的参数鉴别判断信息多(5)溶剂蒸气对色谱行为的影响薄层色谱——“开放”环境下展开，展开剂蒸气也参与展开全过程。展开前蒸气预平衡调整蒸气浓度保持展开溶剂新鲜度改善色

4、谱质量黄连溶剂系统：苯-醋酸乙酯-甲醇-异丙醇-28％氨水(6：3：1.5：1.5：0.25，S1)。检测：置紫外光灯(365nm)下检视图黄连的荧光薄层色谱图1.巴马汀；2.小檗碱；3.表小檗碱；4.黄连碱；5、6.味连；7、8.雅连；9、10.云连；11、12.商品黄连；13.药根碱；14.非洲防己碱S1中浓氨液的蒸气相在色谱中起了关键作用：A仅用S1预平衡15min，氨蒸气量不足，药根碱、非洲防己碱、巴马汀、小檗碱均不能分开；B改用浓氨水5ml在一侧槽中预平衡15min后展开，则药根碱+非洲防己碱、巴马汀、小檗碱均得到

5、分离；CS1中除去浓氨水，仅用浓氨水预平衡，色谱分离度仍很差；DS1中浓氨水改为水，一侧槽中用浓氨水平衡，分离效果同B。巴马汀小檗碱表小檗碱黄连碱大黄游离蒽醌薄层色谱分析,展开剂为石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15:5:1)，用新鲜开瓶的甲酸乙酯时，5种游离蒽醌分离度很好。若用反复多次开瓶使用的甲酸乙酯时，由于甲酸乙酯吸收了空气中水分而或多或少分解而导致色谱的分离度大大降低。或配好的展开剂反复多次使用，各溶剂比例改变，色谱重现性差。1.芦荟大黄素2.大黄酸3.大黄素4.大黄素甲醚5.大黄酚(6)环境因素的影响相对湿

6、度——分离度（牛胆汁：RH<30％,牛磺、甘氨及其去氧胆酸分开；RH>72％，四种分不开）温度——分离度和Rf值三七药材中的三七皂苷R１与人参皂苷Re只有在低温(<10℃)才能分开。R１+ReR１ReReR１实例——人参类药材薄层色谱指纹图谱1.试验材料及仪器(1)对照品人参皂苷Ro、Rbl、Rb2、Rb3、Rc、Rd、Re、Rf、Rgl、Rg2、F2、伪人参皂苷F11、三七皂苷-Rl。(2)薄层板自制硅胶板；预制硅胶60F254板(20cm×20cm)；高效板10cm×10cm(Merck)。(3)仪器Nanomat-Ⅲ、

7、-Ⅱ点样器及全自动点样器、双槽展开缸、VARIO-KS展开槽、HPTICVARIO展开槽、薄层色谱条件控制槽、薄层扫描仪(均为瑞士CAMAG产品)、HP9482薄层色谱扫描软件、CATS薄层色谱扫描及评价软件(CAMAG)、薄层色谱摄像仪(Reprostar，CAMAG)。（4)试药氯仿(精制、重蒸)、乙酸乙酯、正丁醇、甲醇(分析纯)。(5)供试品吉林生晒参、吉林红参、新开河红参、三七、高丽红参、高丽白参、高丽曲参、美国西洋参、加拿大西洋参、国产引种西洋参。2.样品预处理(1)供试液1样品+甲醇→回流提取→提取液→浓缩至近干

8、→水溶解→正丁醇萃取→正丁醇液→减压蒸干→五氧化二磷真空干燥器中干燥→总皂苷→加甲醇溶解，使成每1ml含总皂苷8mg(西洋参、三七为4mg)，作为供试液。(2)供试液2甲醇回流液→适当浓缩→碱性氧化铝小柱→50％甲醇洗脱→洗脱液→减压蒸干→残渣→加水溶解→水溶液→Sep-PakC18小柱→