液氮低温保存对大鼠主动脉平滑肌细胞和成纤维细胞mhc抗原无影响

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1、液氮低温保存对大鼠主动脉平滑肌细胞和成纤维细胞MHC抗原无影响　　摘要:目的探讨液氮低温保存对同种异体主动脉移植物抗原性的影响.方法采用细胞培养技术和流式细胞仪技术研究液氮低温保存对大鼠主动脉平滑肌细胞和成纤维细胞主要组织相容性抗原Ⅰ类（MHCⅠ类抗原）表达的影响.建立大鼠同种异体主动脉移植模型，采用免疫组织化学实验研究新鲜主动脉和低温保存的主动脉同种异体移植后MHCⅠ类抗原和MHCⅡ类抗原表达的区别.结果正常培养的大鼠主动脉平滑肌细和成纤维细胞MHCⅠ类抗原表达的阳性率分别为（88.7±4.3）%和（84.8±2.0）%;液氮低温保存的大鼠主动脉平滑肌和成纤维细胞在复苏后MHCⅠ类抗原表

2、达的阳性率分别为（89.4±3.5）%和（81.9±2.7）%.统计学分析表明大鼠主动脉平滑肌细胞和成纤维细胞的MHCI类抗原表达在液氮低温保存前后无显著性差别.免疫组织化学实验研究表明新鲜主动脉和低温保存的主动脉同种异体移植后MHCⅠ类抗原和MHCⅡ类抗原表达无显著的差异.结论液氮低温保存对大鼠主动脉平滑肌细胞和成纤维细胞MHC类的抗原性没有明显的影响.　　Keyologous;aortic;histopatibilityantiqensclussⅠAbstract:AIMToinvestigatetheeffectoffluidnitrogencryopreservationonthe

3、MHCantigenicityofaortichomo┐grafts.METHODSBymeansofcellcultureandfloetryoothmus-clecellsandfibroblastsofaortichomograftsofrats.HCⅠantigenandMHCⅡanti-genograftsandcryop-reservedaortichomografts.RESULTSExpressionrateofMHCIantigenofculturedsmoothmusclecellsandfibroblastoothmusclecellsandfibroblastsof

4、aortichomograftsaftercryopreservationoothmusclecellsandfibroblastofaortichomograftsbe-tograftsandcryopreservedaortichomografts.CONCLUSIONFluidnitrogencryopreservationhasnoobviouseffectontheMHCantigeniacityofaortichomograftsofrats.　　0引言　　同种异体主动脉是心血管外科常用的修补和替代材料，其移植后的免疫排斥反应是影响移植远期效果的重用因素［1］.液氮低温保存是同

5、种异体主动脉移植物比较成熟的保存方法，在临床上已被广泛地采用.液氮低温保存方法对同种异体主动脉的抗原性影响是同种异体主动脉移植过程中非常重要的问题，同时也是一个有争议的问题［2-4］，在国内外都未见定量研究.我们采用细胞培养方法和流式细胞仪技术，在细胞水平定量研究低温（-196℃）对大鼠的主动脉平滑肌和成纤维细胞抗原性的影响.　　1材料和方法　　1.1实验1:液氮低温保存对培养平滑肌和成纤维细胞MHC抗原的影响　　1.1.1材料SD大鼠，雌雄不限，体质量150～180g，由本校实验动物中心提供.小牛血清（FCS）（浙江四季青生物制品研究所）;RPMI1640培养基（Gibco公司）;胶原酶

6、（Sigma公司）;胰蛋白酶（Sigma公司）;消化液:12gL-1胰蛋白酶10mL，2gL-1ED-TANa210mL，生理盐水80mL分装，-20℃保存;小鼠抗大鼠MHCⅠ类抗原mAb（mouse-anti-ratMHCⅠantigenmAb）（本校免疫教研室提供）使用浓度:PBS（pH7.4，0.01molL-1）50倍稀释;羊抗小鼠IgG荧光抗体（goatantimouseIgGFITC）（北京军事医学科学院邦定公司）使用浓度:PBS（pH7.4，0.01molL-1）10倍稀释;流式细胞仪（美国Coulter公司）.实验分组:A.正常培养的平滑肌细胞组;B.经液氮低温保存的平滑肌

7、细胞组（4gkg-1）ip麻醉，无菌条件下取出主动脉，按Chamley-Campbell［5］的贴壁方法培养平滑肌细胞和成纤维细胞.细胞生长致密时，以1.2gL-1胰蛋白酶及0.2gL-1EDTANa2消化液消化传代.实验采用第3代传代细胞.用20gL-1胶原酶和2.5gL-1胰蛋白酶消化细胞，PBS（pH7.4，0.01molL-1）洗涤2次（冻存的细胞复苏后用培养液将DMSO置换出，再经PBS洗涤），调整细胞密度为1