宫颈癌与hla等位基因dqb1-03、dr15的相关性研究

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1、宫颈癌与HLA等位基因DQB1*03、DR15的相关性研究夏琳，张菊，陈中灿，白玉杰，罗进，杨浩，阎小君【Abstract】AIM：ToinvestigatetherelationshipbetentsofHLADQB1*03andDR15alleles(79and197bprespectively)plifiedbyusingpolymerasechainreactionofsequencespecificprimers（PCR-SSP）incervicalcancerpatientsandhealthycontrolinShaanxiProvince.RESULTS

2、:ThefrequencyoftheDQB1*03allelealcontrols,aybesomecorrelationbetentofcervicalcancerandHLA-DQB1*03,andnocorrelationbetentofcervicalcancerandHLA-DR15.　　【Keys；HLAantigens　　【摘要】目的：探讨我国陕西地区宫颈癌的发生与人类白细胞抗原（HLA）DQB1*03、DR15等位基因的相关性.方法：采用序列特异性引物的聚合酶链式反应（PCRSSP）方法，扩增HLA等位基因DQB1*03、DR15的目的DNA片段（分别为

3、79、197bp），分析两对等位基因在陕西地区宫颈癌患者和正常人中分布频率的差异.结果：45名宫颈癌患者组中DQB1*03等位基因频率显著高于50名健康对照组，DR15等位基因频率在两组中的分布无显著差异.结论：HLA等位基因DQB1*03可能与宫颈癌的发生具有相关性，DR15可能与宫颈癌的发生不存在关联.　　【关键词】宫颈肿瘤；HLA抗原　　0引言　　宫颈癌在全世界范围内已成为威胁女性生命的第二大恶性疾病，仅次于乳腺癌.已证实人乳头瘤病毒（humanpapillomavirus,HPV）的感染是宫颈癌的重要致病原因，但并非所有感染HPV的妇女都发展为宫颈癌，因此认为其

4、他因素在宫颈癌的发生、发展过程中也可能起着促进作用.因此我们选择HLA等位基因DQB1*03、DR15进行研究，探讨其在陕西地区妇女中的分布特征及对宫颈癌易感性的影响.　　1对象和方法　　11对象　　宫颈癌患者组为西京医院妇产科经病理学检查确诊的宫颈癌患者45例，年龄30~74（平均464）岁；正常对照组为西京医院住院治疗的非宫颈癌患者50例，年龄32~71（平均421）岁.　　　　12方法　　121基因组的提取酚氯仿三步法抽提研究对象外周血白细胞基因组DNA.　　122序列特异性引物（SSP）参照Olerup等［1,2］文献设计合成DQB1*03、DR15等位基因序列

5、特异性引物，引物序列如下：DQB1*03：上游引物5′GAGAGGACCCGGGCGGAGT3′，下游引物5′CTCGCCGCTGCAAGGTCGT3′，扩增片段大小为79bp；DR15：上游引物5′TCCTGTGGCAGCCTAAGAG3′，下游引物5′CCGCGCCTGCTCCAGGAT3′；扩增片段大小为197bp.　　123特异性PCR扩增选人生长激素（hGH）的保护序列，扩增作内对照引物.引物序列为：上游引物5′GCCTTCCCAACCATTCCCTTA3′，下游引物5′TCACGGATTTCTGTTGTGTTTC3′.扩增片段大小为429bp.PCR反应总体

6、积为25μL；25mmol/LdNTP15μL，25mmol/LMgCl215μL，Taq酶15U，10×Buffer25μL，等位基因序列特异的及内参上下游引物各10pmol/L，DNA模板20μL，去离子水132μL.混匀、瞬时离心，按如下程序扩增：DQB1*03反应体系：94℃预变性5min后，94℃变性45s，68℃退火30s，72℃延伸30s，循环30次后于72℃过延伸10min.DR15反应体系：94℃预变性5min后，94℃变性45s，60℃退火30s，72℃延伸30s，循环30次后于72℃过延伸10min.　　124特异性扩增产物的检测PCR产物于15g

7、/L琼脂糖凝胶电泳，电压10V/cm，时间20min，电泳结束后，在紫外灯下观察并拍摄扩增产物电泳照片.(责任编辑：admin)　　2结果　　检测样本HLADQB1*03和DR15等位基因扩增产物电泳照片如Fig1、245例宫颈癌患者组HLADQB1*03基因频率为689%（62/90），50例正常对照组HLADQB1*03基因频率为340%（34/100），提示HLADQB1*03等位基因可能增加对宫颈癌的易感性，与宫颈癌的发生具有关联性；宫颈癌患者组HLADR15基因频率为356%（32/90），对照组为310%（31/100），两组