hla-drb1等位基因多态性与幽门螺杆菌感染及胃部疾病的相关性研究

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1、第三军医大学硕士学位论文HLA--DRB1等位基因多态性与幽门螺杆菌感染及胃部疾病的相关性研究姓名：李宁一申请学位级别：硕士专业：临床检验诊断学指导教师：邹全明201205第三军医大学硕士学位论文HLA—DRB1等位基因多态性与幽门螺杆菌感染及胃部疾病的相关性研究摘要背景幽门螺杆菌(Helicobacterpylori，Hpylori)是一种定植于人的胃粘膜的微需氧、螺旋状的革兰阴性杆菌。Hpylori感染普遍存在，己造成全球50％以上的人口感染，尤其在中国等发展中国家，感染率远远高于发达国家。尽管Hpylori感染率很高，但只有大约10—20％感染者出现临

2、床疾病状态。且pylori长期持续性感染可导致慢性胃炎、胃溃疡及胃粘膜相关淋巴组织淋巴瘤等胃部疾病，且与胃癌的发生密切相关，已被世界卫生组织(WHO)列位1类致癌因子。胃炎等胃肠道疾病的发生除了与Hpylori感染有关外，还受到宿主遗传、环境等因素的影响。宿主遗传因素与胃炎等胃肠疾病发生相关性主要体现在与免疫反应相关的免疫遗传因素，尤其是主要组织相容性复合体(MHc)系统。MHC系统编码的人类白细胞抗原(humanleukocyteantigen，HLA)是由一系列紧密连锁的基因座位所组成的具有高度多态性的复合体，是目前所知最具复杂的基因系统并且在免疫反应中

3、起重要的作用。HLA具有单倍体遗传、连锁不平衡(LD)等遗传特征，还具有抗原递呈和等位基因多态性的特点，因此HLA被认为与疾病的发生密切相关。HLA主要包括I和II两类分子，分别介导CD8+和CD4+T淋巴细胞应答，发挥不同的免疫作用。其中II类分子等位基因的多态性与且pylori感染和胃部疾病发生存在一定相关性，已有文献报道。但由于不同的民族、不同的地区甚至研究者运用研究方法的不同，所得到的研究结果存在差异。目前，对于HLA进行的基因分型主要依据PCR反应为基础的分型方法，如PCR—RFLP、PCR—SSOP、PCR．SBT、PCR—SSP、PCR．SSC

4、P。然而这些分型方法都存在着各自的局限性，费用却比较昂贵，其中PCR．SBT的分型方法被公认为是最直接，最准确的分型方法。因此，本课题基于PCR．SBT方法的原理，运用自行设计的特异PCR引物首先建立了PCR—SBT基因分型方法，分析重庆地区汉族人群HLA—DRBl等位基因分布特点与多态性，探讨HLA—DRBl等位基因多态性与Hpylori感染以及感染后胃部疾病第三军医大学硕士学位论文发生与类型的相关性。通过上述研究，为深入揭示Hpylori感染不同个体后多种类型疾病发生的免疫遗传学机制奠定了实验基础。目的本研究通过建立HLA—DRBl的PCR—SBT基因分

5、型方法，对中国重庆地区汉族人群进行HLA—DRBl等位基因分型，揭示HLA—DRBl基因多态性及其分布特点；阐明HLA—DRBl等位基因与Hpylori感染及胃部疾病发生的的相关性。方法1．外周静脉血基因组DNA的提取。运用血液基因组提取试剂盒提取血液基因组DNA，一20。C保存，用于后续PCR。2．HLA—DRBl的PCR—SBT基因分型方法的建立。根据IMGT／HLA数据库中HLA—DRBl第二外显子的基因序列，针对不同亚型第二外显子的碱基序列差异，采用Primer5．0软件设计出八条正向引物和一条反向引物，并由上海英骏生物技术有限公司合成(HPLC纯度

6、)。将扩增的目的条带回收进行DNA测序。运用Chromas和Genetool软件分析和拼接测序结果，并在IMGT／HLA数据库进行比对，以确定其亚型。3．Hpylori感染检测。采用ELISA方法检测血清中抗Hpylori特异性垮G抗体，以分析与判断H-pylori感染情况4．数据分析。运用PCR—SBT的方法对所采集的样本进行HLA—DRBl等位基因分型，组间比较采用卡方(x2)检验，OR值和95％的置信区间用于患病风险的评价。结果1．重庆地区Hpylori感染率为34．2％。2．HLA—DRBl"09：01(29．1％)等位基因频率最高，基因频率最低的是

7、DRBI*12：01、DRBl：l：12：02、DRBl：l：14：05和DRBl半15：02，各占1．26％。3．HLA—DRBl等位基因型频率在男女之间无显著性差异。4．HLA—DRBl*04：05等位基因与Hpylori感染呈负关联(P=0．035、OR=O．265、95％CI=0．076—0．922)。5．HLA—DRBl*15：01等位基因与胃癌或胃炎发生呈负关联(胃癌患者与正常比较，P=0．039、OR=0．287、95％CI=0．091—0．905；胃炎患者与正常比较，P=0．001、OR=O．06】、95％CI=0．007—0．494)。第三

8、军医大学硕士学位论文结论1．成功建立并优化了HLA—