hla-b等位基因特异性表达与肝癌细胞免疫逃逸相关性的初步研究

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1、隶．初大·嘤硕士学位论文万方数据HLA．B等位基因特异性表达与肝癌细胞免疫逃逸相关性的初步研究本论文获国家自然基金(编号81201601)资助万方数据HLA--BAlleleSpecificExpressioninHepatoceHularCarcinomaTissuesandItsRelationshipwithImmuneEscape4DissertationSubmiRedtoSoutheastUniversityFortheAcademicDegreeofMasterofScienceBYWUSh

2、ichaoSupervisedbyProf．ZHANGJianqiongInstituteofLifeSciencesSoutheastUniversityMay2014万方数据东南大学学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得东南大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了

3、谢意。研究生签名：≥卜建日东南大学学位论文使用授权声明东南大学，中国科学技术信息研究所，国家图书馆有权保留本人所送交学位论文的复印件和电子文档，可以采用影印，缩印或其他复制手段保存论文。本人电子文挡的内容和纸质论文的内容相一致。除在保密期内的保密论文外，允许论文被查阅和借阅，可以公布(包括刊登)论文的全部或部分内容。论文的公布(包括刊登)授权东南大学研究生院办理。研究生签名：兰主盥导师签名：万方数据中文摘要HLA．B等位基因特异性表达与肝癌细胞免疫逃逸相关性的初步研究研究生姓名：吴士超导师姓名：张建琼(教

4、授)发育与疾病相关基因教育部重点实验室东南大学生命科学研究院HLA(humanleukocyteantigen)系统是人类多态性最为丰富的遗传系统。截至到2014年3月，IMGT／HLA数据库报道HLA—A等位基因2579个、HLA—B等位基因3285个、HLA．C等位基因2133个。CTL(cytotoxicTcells，CTL)细胞和NK(naturalcell，NK)细胞是肝脏中重要的两类免疫细胞，它们均通过与HLAI类分子相互作用调节机体的免疫功能。CTL细胞通过其表面受体分子TCR识别靶细胞表面

5、的经典HLAI类分子提呈的抗原肽启动细胞毒作用。NK细胞通过其表面一系列抑制性或活化性受体KIR(killercellimmunoglobulin．1ikereceptor，K／R)分子与HLAI类分子相互作用来调节免疫活性。在生理条件下，抑制性作用信号占主导；当肿瘤发生时，肿瘤细胞表面HLAI类分子表达发生变化，活化信号占主导，使NK细胞活化进而发挥免疫杀伤作用(“missingself理论”)。肝癌细胞的存活需要同时逃逸CTL和NK细胞的双重杀伤。因此，我们推测肝癌细胞可能通过选择性调节经典}I】二A

6、I类分子等位基因的表达逃逸机体的免疫杀伤。为验证该推测，以南京地区原发性肝癌及癌旁标本作为研究对象，首先对HLA基因和ⅪR基因进行分型，同时针对人群中分布频率大于3％的HLA．B等位基因进行等位基因特异性定量PCR：3『物的设计与验证，然后利用realtimePCR对原发性肝癌／癌旁样本进行HLA．B等位基因mRNA表达的检测。利用HLA．G分子特异性引物与抗体分别在mRNA水平与蛋白水平检测HLA．G分子的表达，并结合KIR分型结果初步探讨HLA．B等位基因和HLA．G分子的表达与肝癌细胞免疫逃逸之间的

7、相关性。研究结果如下：1．利用PCR-SBT完成HLA．A、B、C基因分型的样本例数分别为38例、39例、31例，另完成6例细胞系(293T、NK92、BR、HepG2、THP、KB)H】．一A—A、B、C基因分型以用作阳参；利用PCR-SSP完成39侈1J样本的KIR基因分型，并根据个体KIR基因不同将KIR基因型分为KIR．AA和ⅪR-BX。抑制。I生KIR3DLl分子和活化。I生KIR3DSl分子的分布频率分别为97．4％矛1143．6％，KIR2DL4分子为框架基因，分布频率为100％。2．完成人

8、群中分布频率大于3％的HLA．B等位基因特异性定量PCR引物的设计与验万方数据东南大学硕士学位论文证，共设计43对HLA—B等位基因特异性定量PcR引物，经验证后有2l对引物符合实验要求，可以用于等位基因表达的定量分析。3．完成39侈1J样本癌和癌旁组织各78个HLA．B等位基因mRNA定量表达的检测，并根据HLA．B等位基因外显子2编码序列的第80．83位氨基酸将其分为HLA．Bw4和HLA．Bw6。结果显示：HLA．Bw4