细胞壁缺陷结核分枝杆菌耐药性的基因研究

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1、细胞壁缺陷结核分枝杆菌耐药性的基因研究王和罗振华徐艳梁菁苹【摘要】目的检测与分析细胞壁缺陷结核分枝杆菌的耐药性相关基因，探讨细胞壁缺陷结核分枝杆菌耐药性的基因基础。方法分别分离16株自发形成和用利福平、异烟肼、乙胺丁醇诱导形成的结核分枝杆菌的染色体DNA，PCR扩增IS986序列以及rpoB、katG和embB基因后进行凝胶电泳和序列分析。结果自发形成及抗结核药物诱导形成的结核分枝杆菌稳定L型可在含利福平(4μg/ml)、异烟肼(0.2μg/ml)、乙胺丁醇(7.5μg/ml)的培养基内生长与传代培养。基因检测与分析显示，结核分枝杆菌稳定L型仍然

2、保留IS986基因，rpoB、katG、embB基因也未见突变。结论结核分枝杆菌稳定L型可自发形成，也可被利福平、异烟肼和乙胺丁醇诱导形成。结核分枝杆菌稳定L型对利福平、异烟肼、乙胺丁醇形成耐药性，但其染色体上耐药相关基因并没有发生突变。除染色体耐药相关基因突变可造成结核分枝杆菌形成耐药性外，细胞壁缺陷也是造成结核分枝杆菌形成耐药性的一个重要机制。【关键词】结核分枝杆菌；细胞壁；基因；耐药性ABSTRACTObjectiveTodetermineandanalyzethegenesrelatedtodrugresistance,andprobet

3、hepropertiesofdrugresistancegenesofMycobacteriumtuberculosis.MethodsThesequenceofIS986andthegenesofrpoB,katGandembBtheL-formsderivedspontaneouslyandinducedbyrifampin,isoniazidandethambutolrespectivelyfrom16strainsofM.tuberculosis,andthenthegenesinedbyagarosegelelectrophoresis

4、andanalyzedbydirectsequencing.ResultsThebothofL-formsderivedspontaneouslyandinducedfromM.tuberculosisoticliquidmediapin(4μg/ml),isoniazid(0.2μg/ml)andethambutol(7.5μg/ml)respectively.ThesequenceofIS986andthegenesofrpoB,katGandembBsandnogenemutation.ConclusionTheL-formsedspont

5、aneouslyorinducedbyrifampin,isoniazidandethambutol.TheL-formsderivedeitherspontaneouslyorinducedbytheantibacterialdrugsfromdrugsusceptiblestrainsofM.tuberculosisrevealedtheresistancetorifampin,isoniazidandethambutolbutnogenemutationofrpoB,katGandembBcouldbefoundinthevariants.

6、ItportantresistantmechanismofM.tuberculosisbesidesthechromosomalgenemutation.KEYycobacteriumtuberculosis;Celltuberculosis)分别为质控菌1株(H37Rv，R#934，编号93009)，中国药品生物制品检定所提供，本室编号Mk；临床分离菌15株，获自贵阳市肺科医院住院肺结核患者痰标本，本室编号M1～M15。(2)培养基苏通培养基，按文献〔4〕方法制备。(3)诱导剂利福平胶囊(rifampin，RFP)，批号：国药准字H210219

7、05，沈阳红旗制药有限公司提供；异烟肼片(isoniazid，INH)成都锦华药业有限公司提供，批号H51020788；乙胺丁醇片(ethambutol，EMB)批号010101，成都锦华药业有限公司提供。(4)结核分枝杆菌基因检测试剂盒扩增结核分枝杆菌染色体DNA重复保守序列IS986，引物碱基序列为5＇-CGTGAGGGCATCGAGGTGGC-3＇，5＇-GCGTAGGCGTCGGTGACAAA-3＇，扩增产物分子量为245bp。华美生物工程公司提供，批号20050501。(5)结核分枝杆菌耐药基因检测试剂盒rpoB基因检测试剂盒扩增序列涵

8、盖rpoB基因的第507至533位密码子，rpoB基因外套引物碱基序列为rpoBP1：5＇-CGTGGAGGCGATCACACCGCA-