经皮附睾穿刺取精术结合单精子卵细胞质内显微注射技术治疗梗阻性无精子症论文

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1、经皮附睾穿刺取精术结合单精子卵细胞质内显微注射技术治疗梗阻性无精子症论文罗亚宁，张顺，李丽，周婷，黄剑磊，王晓红【摘要】目的：探讨经皮附睾穿刺取精子术（PESA）结合单精子卵细胞浆内显微注射技术（ICSI）治疗梗阻性无精子症的临床效果.方法：根据精子来源和精液质量参数分为3组.梗阻性无精子症患者44个周期采用PESA获得精子，女方进行常规促排卵并获得成熟卵细胞后，用ICSI技术进行受精(A组)；同期严重少弱畸精症患者75个周期(B组);少弱精症患者45个周期(C组).比较3组的受精率、卵裂率、优质胚

2、胎率、临床妊娠率和胚胎种植率.结果：3组比较5项统计结果均无统计学差异.结论：附睾穿刺取到的精子和体外排出的精子具有相同的受精和获得优质胚胎的能力.freelicsperminjection)技术获得后代的机会，要远大于除供精人工受精以外的其他治疗措施［1］.我们采用PESA(percutaneousepididymalspermaspiration)取精方法结合ICSI技术治疗梗阻性无精子症，取得了很好的疗效.1对象和方法1.1对象200405/200707在我中心接受ICSI技术助孕治疗的1

3、64个周期，根据精子来源和精液质量参数分为3组：男方采用经皮附睾穿刺吸取少量精子的无精子症患者44个周期作为A组（PESA组），同期严重少弱畸精症患者75个周期作为B组，轻度少弱畸精症患者45个周期作为C组.入选PESA组的患者符合如下条件：①至少2次射出精液经离心后未见精子；②双侧睾丸总体积30mL；③血清FSH值在正常范围；④睾丸活检结果提示曲细精管内可见各级生精细胞及成熟精子；⑤染色体核型分析及Y染色体微缺失筛查结果均正常.3组的女方均为原发性不孕症，辅助生殖前相关检查未见异常.1.2方法1.

4、2.1促超排卵及卵母细胞收集及处理按文献［2］的方法进行.1.2.2精子获取和精液处理PESA组常规消毒外生殖器，20g/L盐酸利多卡因封闭精索及局部麻醉阴囊皮肤，将附睾固定于阴囊皮下，用1mL注射器接16G套管针并吸取0.2mL精子处理液，经皮刺进附睾头部，持续低负压抽吸附睾液，直至取得略浑浊的附睾液为止.将吸出的液体滴入培养皿并在显微镜下观察.见活动精子后停止取精，将收集到的精子经微Isolate梯度法处理或直接洗涤后备用.冷冻保存时将取到的附睾液和等量的冷冻保护剂充分混匀，将混合液分装入冻存管

5、中.程序冷冻后置于液氮罐保存.解冻时先置于37℃水浴，完全解冻后再行精液处理.B组和C组手淫取精，采用上游法或Isolate梯度法处理精液.1.2.3显微操作显微操作在NIKONTE300配Hoffman调制反差光学系统、Eppendorff显微操作系统下放大200倍条件下进行.选择活动力强、形态正常的精子用注射针按压精子尾部直至其失去活动力，将1条制动后的精子吸入注射针.选择MⅡ期卵母细胞用固定针固定在第一极体位于12点钟或6点钟位置上，将吸入制动精子的注射针从卵母细胞3点钟方向刺入，回吸少量卵浆

6、，卵膜破裂后，将精子注入卵浆内.1.2.4胚胎培养及胚胎移植注射后16~20h在倒置显微镜下观察受精情况.有雌、雄原核和第一、第二极体者为正常受精的合子，正常受精的合子继续置于37℃，50mL/LCO2培养箱培养.取卵后48~72h，选择质量优良的2~3个胚胎移植入子宫腔.其余符合冷冻条件的胚胎冷冻保存.1.2.5黄体支持和监测胚胎移植后，用HCG或黄体酮维持黄体功能，于移植后15d查尿或血HCG，若阳性则于停经7icsperminjection(ICSI)in2006:EvidenceandEvo

7、lution［J］.HumReprodUpdate,2007,13(6):515-526.［2］王晓红，罗亚宁，姚元庆.卵母细胞浆内单精子显微注射技术的临床应用［J］.陕西医学杂志,2005,33(11):977.［3］PalermoG,JorisH,DevroeyP,etal.Pregnancyafterintracytoplasmicinjectionofasinglespermatozoonintoanoocyte［J］.Lancet,1992,340(8810):17-18.［4］李满，庄广

8、伦，李蓉，等.用射出精子、附睾精子、睾丸精子显徽授精治疗男性不育［J］.中华外科杂志,2000,.freelviengchaiS,etal.parisonofthefertilizationrateafterintracytoplasmicsperminjection(ICSI)usingejaculatedsperms,epididymalspermsandtesticularsperms［J］.JMedAssocThai,1998,81(8):565-571.［6