卵泡内精子显微注射治疗弱精子症

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1、卵泡内精子显微注射治疗弱精子症　　中华泌尿外科杂志CHINESEJOURNALOFUROLOGY　　1999年第2期434001湖北省荆州市第三人民医院泌尿外科黄强　韩见知同济医科大学同济医院泌尿外科章咏裳　　弱精子症是男性不育的常见原因，自然妊娠率低。Palermo等［1］首先报道的卵泡内精子显微注射（ICSI），是一种新发展起来的辅助授精技术，方法是将获得的精子直接注入卵泡内完成受精［1-3］。本技术精子无需发生顶体反应，明显提高了弱精子症的受精率和妊娠率，故可用于常规体外授精治疗后仍无正常受精或受精率低于5%、活力精子数目在5

2、×105/ml以下，近端精路梗阻者［3］。李蓉等［4］采用ICSI授精技术治疗严重男性不育患者也获得成功。　　一、促卵巢排卵　　从治疗前一个月经周期的黄体期开始，每天经皮下注射1mg醋酸利普安使垂体处于脱敏状态。在月经的第1天开始卵巢被药物刺激，以促进卵泡发育，此时血清雌二醇水平低于0.22nmol/L，经阴道的超声波检查无卵泡生长，卵巢呈静止状态。在卵巢药物刺激的第1、2天，每天给予150IU的人绝经期促性腺激素（HMG）和150IU纯化的卵泡刺激素（FSH），在卵巢药物刺激的第3、4、5天，每天只给予150IU的HMG。从卵巢刺

3、激的第6天开始，根据人体血清雌二醇水平和经阴道超声波检查图像决定HMG的注射量。当血清雌二醇≥2.94nmol/L，B超检查有两个或更多的直径在1.9cm以上的卵泡时,给予10000IUHCG促使排卵。在HCG注射后，停止给予醋酸利普安和HMG［3］。　　二、取卵及分离　　(一)卵子的收集［5］　　1.通过腹腔镜穿刺卵泡取卵。用腹腔镜检查卵巢状况后，插入特制的双腔针穿刺卵泡，以负压小于14kPa，吸出卵细胞及卵泡液，并即刻在显微镜下检查以确定吸出完整的卵子。必要时可进行第二次抽吸，抽吸出的卵子转移至培养液中。　　2.B超引导下穿刺取

4、卵。其途径有经腹部和经阴道二种。　　(二)卵子的分离　　穿刺吸取的卵母细胞浸于Earle平衡盐液中，4～6分钟后用缓冲液反复冲洗卵子，再用巴斯德吸管轻轻吸除清洗粘附着的放射冠［5］。　　清洗后的卵母细胞在37℃、5%O2、5%CO2、90%N2的培养箱中孵育。4小时后开始观察卵母细胞，第一个极体出现后，即为处于中期的卵母细胞，可用于卵泡内精子显微注射。应用前，卵母细胞置于Dulbecco磷酸盐缓冲液或含0.1mol/L蔗糖的Earle平衡盐液中保存［5］。　　三、精子的准备　　(一)手法取精　　禁房事3日以上，用手淫法采取精液标本，

5、室温下液化，作精液常规检查。当精子数目小于1×105/ml时，诊断为弱精子症。将精液标本以600次/分的速度离心10分钟，取出离心沉淀的精液标本置于5ml体外受精培养基中，再以600次/分的速度离心5分钟，浓缩后的精液标本重新放置于体外受精培养基中，并在37℃和含5%CO2的培养箱中孵育。注射前再次离心［3］。　　(二)附睾或睾丸获取精子　　有精路梗阻［6］时可采用下列途径获取精子。　　1.小切口附睾吸取精子（MESA）。选用静脉麻醉或局部浸润麻醉，在25～40倍手术显微镜下，于附睾头部作一纵形切口。于近端的附睾小管处，用塑管吸取无

6、血细胞的附睾液体［7］。附睾头为精子的最佳储存地，此法常能达到获取精子的目的，但也存在一定的手术并发症，如感染、血肿、术后疼痛和术后附睾的纤维化等［7-9］。　　2.经皮穿刺附睾抽吸精子（PESA）［8、9］。局部麻醉，配置一个20ml注射器和21G蝶形针头，抽吸前用拇指和食指固定睾丸，触及附睾，穿刺针刺入附睾头或附睾体，轻轻抽吸，标本液进入微吸管。当从附睾吸出的液体停止流动时，用一个闭合的动脉钳夹住微吸器，取下针头，将吸取液转移至含体外受精培养液的的falcon试管中。同法吸取对侧附睾内精子，以获取更多数量的精子。PESA的成功与

7、附睾扩张程度有关，而且多个附睾穿刺点有助于PESA的成功。PESA较MESA简单、有效，并发症亦较少［6］。　　3.从睾丸组织碎块中分离精子。在MESA和PESA采集的精液标本无法满足卵泡内显微注射时,可切取睾丸组织碎块，从中分离出精子。采用局部浸润麻醉，经阴囊切口切除0.5g的睾丸组织。置于佩特里细菌培养皿中（内含3μlEarle培养液）。解剖睾丸组织，使精子从睾丸组织中分离出来，并放置于含25%血清蛋白的3μlEarle培养液中，使精子进一步发育成熟［10，11］。　　四、显微注射及判断受精　　行卵泡内精子显微注射的器械，包括两

8、个带吸管头的毛细玻璃管，分别作为固定管和注射管。固定管的内外径分别为20μm和100μm。注射管的内外径分别为5μm和7μm，其前端有一　　50°斜角的尖锋，可以帮助毛细玻璃管穿越透明带。显微注射在附有加热台的400×显微镜下进　　行