hiv tat 蛋白结合tar的抗艾滋病药物筛选模型的建立研究

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1、HIV1Tat蛋白结合Tar的抗艾滋病药物筛选模型的建立研究作者：李在留刘朝奇，邹坤，李凤兰，韩钰，杨凡，王磊黎 【摘要】 目的建立HIV-1Tat蛋白结合Tar的抗HIV-1药物筛选模型用于抗HIV药物筛选。方法构建表达HIV-1Tat蛋白的真核表达质粒和HIV-1LTR-luc荧光素酶报告基因，采用脂质体转染法共转染HeLa细胞，荧光仪检测Tat蛋白促进荧光素酶在HeLa细胞内的表达情况，建立HIV-1Tat蛋白结合Tar的细胞模型，用于抗HI慌V-1的药物筛选。以DRB为阳性对照熄，进行模型的建立及条件的优化。结果通Ⅳ过反复试验表明，目的基因

2、和报告基因的环配比、转染时培养液中小牛血清的含量、叻细胞浓度、转染前细胞状态以及药物作用叛时间的长短等对模型的稳定性和敏感性有ぼ影响。结论应用优化的细胞模型对文冠果亻、紫苏等浸提物进行筛选及结果的分析。耍【关键词】 HIV-1TatLTR-Luc荧光素酶基因艾滋药物筛选模型Abstract:Objective瘅ToestablishHIV-1Ta角lbindingtoTarmodel.MethodsHIV-1Tatpr蕲otEineukaryoticexpìressionplasmidandl锱13/13uciferasereportgen绎eH

3、IV-1LTR-luc(LTR-LUC)wereconstructe豪dandtransfectedint仞oHeLacellswithlipo年fectamine2000.Thee犭xpressionofHIV-1Ta决tprotEIninHeLacell嘧swasdetectedwithIu旅minometer.HIV-1Tat蒙proteinbindingtarmodelforscreeningHI力V-1inhibitorswasth炮erebyTheabstractio帑nsofXanthocerassor忉bifoliaandPeri

4、llaf赠rutescensandsoonwe陬redetectedandDRB(5氤,6-dichloro-1-β-D-ｄrobofuranosylbenziчmidazole)waspositiΑvecontrol.Thestabilityofthemodelwast憨estedandregulated.疃ConclusionTherepea政tedexperimentsindicatethatthematchin枷gof purposegeneand栉reportgene,therate濂ofnewcalfseruminme暇diumdur

5、ingtransfec骶tion,densityofthet螗ransfectedcells,conditionoftheuntran祷sfectedcellsandthe铵actiontimeofdrugsa抚ffectthestabilitya鲆ndsensitivityofthe赝model.Keywords:HI砝V-1Tat;  LTR-Luclu锰ciferasegene;  Modelforscreening人类免拦疫缺陷病毒是获得性免疫缺陷综合征的病Т13/13原体；是一种逆转录RNA病毒，被称为瀵“20世纪的瘟疫”，在全球广为传

6、播，至今尚无根治药物。现已批准上市的药物骑只能缓解病痛，价格昂贵、毒副作用大，屦病毒易产生变异性、耐药性，药效较差、抵消等［1，2］。因此，从艾滋病病毒的基础研究中寻找新的不易产生耐药性的明靶点成为国内外研究热点。目前抗HIV药物的研究重点集中在逆转录酶、蛋白酶苟、整合酶及病毒吸附、融合等几个靶点。沮HIV反式激活因子(transact德ivator，Tat)作为HIV的调鹞节蛋白，不仅可以通过反式激活效应调控祠病毒基因的复制与表达，还可以诱导细胞境凋亡，激活静态T淋巴细胞，抑制免疫细苡胞的分化和增殖，有助于病毒的感染和体内传播，导致各种并

7、发症等［3，4］。⑸Tat与反式激活效应区RNA相互作用谡，反式激活转录。Tat和TAR的结构具有高度保守性，使它成为寻找新的作用机制和不易产生耐药性的抗艾滋病药物的非常有吸引力的新靶点［5］。Tat凄基因编码蛋白可与HIV-1病毒长末端糙重复序列结合，以增加病毒所有基因转录宜率，也能在转录后促进病毒mRNA的翻扭译，导致病毒的复制增加［6］。本研究煤通过建立HIV-1Tat和LTR的结蚋合，导致报告基因荧光素酶在细胞内的高醍表达，反映Tat和LTR序列的有效结嘧合，建立Tat的反式激活效应调控病毒芭基因的复制与表达模型，从而用于天然药产物有效

8、成分的筛选，具有简单、快速、微刊13/13量、费用低廉、安全、不受P3实验室限逐制，不用同位素等特点，可为实