小剂量顺铂增加人宫颈癌hela和siha细胞对光动力治疗敏感性的研究

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1、小剂量顺铂增加人宫颈癌Hela和Siha细胞对光动力治疗敏感性的研究：王海燕，张友忠，姜侃，焦慧，王兆婧【摘要】目的探讨小剂量顺铂增加人宫颈癌Hela和Siha细胞系对光动力治疗的敏感性及细胞凋亡的机理。方法将Hela和Siha细胞分为空白对照组、单纯光动力治疗组、单纯顺铂治疗组和光动力加顺铂治疗组，MTT法检测各组人宫颈癌细胞株Hela和Siha的增殖情况。采用免疫细胞化学法检测各组Hela和Siha细胞受作用后P185cerbB2蛋白的表达情况。结果顺铂和光动力治疗联合应用导致细胞凋亡的程度均明显强于单一顺铂作用或光动力作用，细胞中P185cerbB2蛋白的表达下降程度也与之相一致

2、。但是先顺铂后光动力治疗和先光动力治疗后顺铂相比，作用效果差异不明显。结论顺铂和光动力联合治疗在体外对人宫颈癌Hela和Siha细胞有明显增殖抑制作用，强于单独一种方法治疗，其机理可能与抑制P185cerbB2表达有关。【关键词】5氨基酮戊酸;顺铂;光动力疗法;免疫细胞化学;宫颈癌细胞株　　ABSTRACT:ObjectiveToinvestigatethemechanismofsmalldosecisplatininenhancingphotodynamictherapysensitivityandapoptosisinhumancervicalcarcinomacelllines.

3、MethodsTheHelaandSihacellsictherapyonly,cisplatinonly,photodynamictherapyandcisplatin).TheeffectsonproliferationofHelaandSihacellsinthefourgroupsinedbyMTTassay.TheexpressionofP185cerbB2inHelaandSihacellsaffectedmunocytochemistry.ResultsThedegreeofapoptosiscausedbythejointapplicationofcisplatinandp

4、hotodynamictherapyictherapyalone.TheexpressionofP185cerbB2incellsdeclinedcorrespondingly.Hoictherapydidnotcauseobviousdifferencesintheeffect.ConclusionTheinvitroproliferationofHelaandSihacellsisrestrainedobviouslybycisplatinbinedictherapy;theeffectisgreaterthanthatofcisplatinorphotodynamictherapyo

5、nly.ThemechanismofcispatinsenhancementofphotodynamictherapysensitivitymayberelatedtoinhibitingP185cerbB2expression.　　KEYI1640培养液中，放置于37℃、50mL/LCO2、饱和湿度的培养箱中，用2.5g/L的胰蛋白酶常规传代培养。实验时用处于对数生长期的细胞。　　1.3照射方式及实验分组光动力激光治疗仪的红光(波长630nm，功率300mTT法筛选ALA浓度和激光能量的最佳组合参数取处于对数生长期的Hela和Siha细胞，以5×104个/孔的密度接种于96孔培养板中

6、，培养24h后加入用不含血清的RPMI1640培养液稀释的ALA，使其终浓度分别为0.1、0.25、0.5、1、2、4mmol/L。均设有单独培养液的空白对照组、单纯给药组和单纯照射组。每组3个复孔。加入ALA后在孵箱内避光培养6h，将含药液弃去，进行激光照射，激光波长630nm，由上而下垂直照射在单层细胞上，激光能量分别为1、5、10、20J/cm24种照射剂量。照射完毕后，给细胞更换含有血清的RPMI1640培养液，避光培养24h。然后弃去培养液，每孔加入180μL新鲜无血清RPMI1640培养液和20μL浓度为5mg/mL的MTT溶液，37℃避光孵育4h。小心吸弃孔内培养液上清，每

7、孔加入150μLDMSO，避光振荡10min后，以490nm为测量波长，620nm为参考波长，在全自动酶标仪上测定各孔的吸光度值(A)，各平行孔的A值取平均数。计算细胞增殖抑制率，公式：细胞增殖抑制率=[(对照组A值-空白组A值)-(实验组A值-空白组A值)]/(对照组A值-空白组A值)×100%。采用改进寇氏法[2]计算半数抑制量(IC50)。重复3次以上，计算均值。　　1.5MTT法检测人宫颈