蛋白激酶c在大鼠重症急性胰腺炎中的表达的论文

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1、蛋白激酶C在大鼠重症急性胰腺炎中的表达的论文作者：王斌生,曹农,柴琛,俞永江,武光【摘要】目的:探讨蛋白激酶c(pkc)家族成员pkcα和pkcδ在重症急性胰腺炎(sap)大鼠胰腺及肺脏中的动态表达情况和组织病理改变的关系.方法：胰胆管逆行注射牛黄胆酸钠制成大鼠sap模型，观察胰腺及肺脏病理学变化，采用免疫组织化学方法分别检测pkcα，pkcδ在sap大鼠胰腺和肺脏中的表达情况,并进行对比分析.采用逆转录多聚酶链反应（rtpcr）检测96只大鼠胰腺组织中pkcmrna的表达情况.结果：建模后1，6，12和24h假手术（so）组胰腺中pkcα表达分别

2、为0.70±0.04，0.71±0.05，0.75±0.04和0.71±0.07；sap组分别为0.83±0.05,0.95±0.09,1.10±0.10和1.08±0.16，两组各时间点之间差异均有统计学意义（p<0.01）.轻型急性胰腺炎（map）组大鼠建模后胰腺中pkcα表达分别为0.73±0.04,0.73±0.03,0.85±0.08和0.84±0.06，与so组各时间点相比，在12h和24h差异具有统计学意义（p<0.05），与pkcα相类似，pkcδ的表达在1h开始增高，12h达到高峰，且维持时间较长.map组pkcδ在12h

3、达到高峰，但维持时间较短，24h时有所减低.结论：pkcα在sap的病程发展中起重要作用.监测pkcα水平可为sap的早期诊断提供帮助.【关键词】胰腺炎;信号传导;蛋白激酶c;逆转录聚合酶链反应　　0引言　　近年来,重症急性胰腺炎（severeacutepancreatitis,sap)的研究多集中在炎症因子通过信号传导引发全身炎性反应综合征(systemicinflammatoryresponsesyndrome,sirs),并渐进发展成为多器官功能障碍综合征(multipleorgandysfunctionsyndrame,mods)上，但对于sa

4、p的早期诊断仍缺乏特异性指标.已有研究［1-2］证实蛋白激酶c(proteinkinasec,pkc)可调控多种促炎因子（il1,il12,tnf和nfκb等）的活化，测定血清il12水平能预测sap的预后，对其早期诊断具有重要意义［3］.我们采用免疫组织化学法和rtpcr法测定pkc在sap中的表达水平，以探讨pkc在sap中的作用机制，为临床诊治sap提供依据.　　1材料和方法　　1.1材料清洁级sd大鼠96只（雌雄各半），体质量220～260g，（甘肃省中医学院实验动物中心），实验前12h禁食，自由饮水.牛黄胆酸钠(美国sigma公司)

5、；一步法总rna提取试剂trizol(美国invitrogen公司)；一步法反转录聚合酶链式反应(rtpcr)试剂盒（大连宝生物公司）；即用型sabc免疫组化染色试剂盒，兔抗pkcα，鼠抗pkcδ和dab显色试剂盒(武汉博士德公司).　　1.2方法　　1.2.1实验分组96只sd大鼠随机分为假手术(shamoperation，so)组、轻型急性胰腺炎（mildacutepancreatitis，map）组和sap组，每组动物32只.　　1.2.2模型制作map组大鼠术前禁食12h，自由饮水,戊巴比妥钠30mg/kg腹腔麻醉,无菌条件下上腹正中切口进腹

6、,于十二指肠内侧见片状分布的胰腺,肝门部胆胰管用无损伤动脉夹夹闭,从胆胰管开口十二指肠系膜缘对侧肠壁穿刺插入导管,导管进入肠腔后对准膨大壶腹中心插入胆胰管约1cm,用微量泵以0.1ml/min速度推注20ml/l牛磺胆酸钠1ml/kg,推注完毕后无损伤动脉夹夹闭胰胆管壶腹部观察10min后拔管,去除动脉夹,缝合十二指肠穿刺口并关腹.sap组用微量泵以0.1ml/min速度推注50ml/l牛磺胆酸钠1ml/kg,其余步骤同map组.so组开腹仅轻轻翻动胰腺，关腹后皮下注射40ml/kg生理盐水.　　1.2.3取材和评分各组动物在建模后于1，6，12和24

7、h四个时间点，（各时间点8只动物）以戊巴比妥钠腹腔注射麻醉，经原切口入腹，无菌条件下取胰腺和肺脏，分别保存于40g/l甲醛及-80℃冰箱，按文献［4］的方法，由病理医师对大鼠胰腺及肺脏组织在光镜下按水肿、出血、感染和坏死四方面的轻重程度进行盲法病理评分.　　1.2.4免疫组织化学染色切片脱蜡至水，ph6.0的枸橼酸盐缓冲液微波抗原修复，室温下3g/lh2o2孵育30min，山羊血清封闭背景，加兔抗pkcα多克隆抗体及鼠抗pkcδmab（1∶50）4℃过夜，滴加二抗37℃孵育1h，加链酶亲和素生物素过氧化物酶复合物，室温孵育1h，dab显色，苏木素复

8、染细胞核，乙醇脱水.阴性对照以pbs代替一抗.1.2.5rtpcr检测取组织100mg匀浆后