大鼠重症急性胰腺炎胰腺组织中no生成及inos表达的变化论文

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1、大鼠重症急性胰腺炎胰腺组织中NO生成及iNOS表达的变化论文【摘要】目的探讨重症急性胰腺炎(SAP)时胰腺组织一氧化氮(NO)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的变化。方法36只健康雄性Sprague-DaRNA表达的变化。结果与对照组相比，SAP组在6h时间点上，胰腺组织中NO水平、iNOS活性明显升高(P0.01)，免疫组化和RT-PCR结果也显示iNOS蛋白及iNOSmRNA表达增高(P0.01);随时间延长，在12h和24h各指标到达高峰，24h仍维持在较高水平(P0.01)。结论在SAP时，随着时间的延长.freelat

2、ionofnitricoxide(NO)andtheexpressionofinduciblenitricoxidesynthase(iNOS)inpancreatictissueinsevereacutepancreatitis(SAP)inrats.MethodsThirty-sixhealthymaleSprague-Dalyallocatedintosham-operatedgroup(controlgroup)andSAPgroup(n=18each).ThemodelofSAPtaurocholateintothemon

3、choledocho-pancreaticductinSDrats.Thesamedosageofnormalsalineelysacrificedat6h,12hand24h,respectively(n=6each),andtheirbloodsamplesamylaselevelsandthepathohistologicalchangesofthepancreasetricmethod.TheexpressionofiNOSproteinsandiNOSmRNAinthepancreasinedbyimmunohistoch

4、emistryandreversetranscriptasepolymerasechainreactionmethod(RT-PCR),respectively.ResultsTheNOlevelandtheactivityoftotaliNOSinthepancreasat6hsignificantlyincreasedintheSAPgroupasparedtothecontrolgroup(P0.01).ImmunohistochemistryandRT-PCRalsorevealedanincreaseintheexpres

5、sionofpancreaticiNOSproteinandmRNAinthepancreas(P0.01).Eachparameterincreasedeandreachedthepeakat12handstillretainedahighlevelat24h(P0.01).ConclusionInSAP,theiNOSexpressioneandthusthehighconcentrationofNOa公司)，NO检测试剂盒(南京建成生物工程研究所)，iNOS免疫组化试剂盒(北京中杉金桥生物技术有限公司)，TIANScriptM

6、-MLVRT-PCR试剂盒(上海捷瑞生物公司)，iNOS及β-actin引物合成由上海生工生物工程技术服务有限公司完成。全自动生化分析仪(美国Vitros公司)。1.3方法1.3.1动物分组及SAP模型制备36只大鼠随机分为2组。SAP组(n=18)：采用Aho法1，逆行胰胆管注射5%牛磺胆酸钠(0.1ml/100g)制备SAP模型;对照组(n=18)：处理方法同SAP组，以等量生理盐水替代5%牛磺胆酸钠。于制模成功后第6、12、24h，每组分别随机选取6只大鼠，予以牵拉颈部处死。心脏穿刺抽血，血清存于-20℃冰箱中保存备检;从胰腺

7、相同位点分别取胰腺组织立即放入液氮中，2h后转入-70℃冰箱中保存;部分胰腺组织用10%中性甲醛固定24～48h，常规脱水、包埋。1.3.2血清淀粉酶的测定用全自动生化分析仪，采用碘比色法测定血清淀粉酶。1.3.3胰腺组织病理学观察胰腺组织常规浸蜡、包埋，3μm厚度切片，苏木精-伊红染色。光镜下(×100)每张切片随机选取10个高倍镜视野，从水肿、感染、出血和坏死4个方面评价胰腺组织损伤的程度。参考Kusske标准2，由2位专业病理医师双盲阅片;各项最低分为0，最高分为4分;取各项积分总和为最终得分。1.3.4胰腺组织NO的检测取冰

8、冻胰腺组织100mg，加入生理盐水，制备成10%的组织匀浆，低温离心(3000r/min)10min，取上清液，根据试剂盒说明书完成NO含量的检测。NO活性单位以μmol/g表示。同时用考马斯亮蓝G-250测定组织蛋白。1.3.6胰腺