大鼠重症急性胰腺炎胰腺组织中no生成及inos表达的变化

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1、大鼠重症急性胰腺炎胰腺组织中NO生成及iNOS表达的变化【摘要】目的探讨重症急性胰腺炎(SAP)时胰腺组织一氧化氮(NO)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的变化。方法36只健康雄性Sprague-DaRNA表达的变化。结果与对照组相比，SAP组在6h时间点上，胰腺组织中NO水平、iNOS活性明显升高(P<0.01)，免疫组化和RT-PCR结果也显示iNOS蛋白及iNOSmRNA表达增高(P<0.01);随时间延长，在12h和24h各指标到达高峰，24h仍维持在较高水平(P<0.01)。结论在SAP时，随着时间的延长，iNOS表达增高，从而产生高浓度的

2、NO，加重胰腺组织的损伤。【关键词】重症急性胰腺炎;一氧化氮;诱导型一氧化氮合酶　Abstract:ObjectiveToinvestigatethechangesintheformationofnitricoxide(NO)andtheexpressionofinduciblenitricoxidesynthase(iNOS)inpancreatictissueinsevereacutepancreatitis(SAP)inrats.MethodsThirty-sixhealthymaleSprague-Dalyallocatedintosham-operatedgro

3、up(controlgroup)andSAPgroup(n=18each).ThemodelofSAPtaurocholateintothemoncholedocho-pancreaticductinSDrats.Thesamedosageofnormalsalineelysacrificedat6h,12hand24h,respectively(n=6each),andtheirbloodsamplesamylaselevelsandthepathohistologicalchangesofthepancreasetricmethod.TheexpressionofiN

4、OSproteinsandiNOSmRNAinthepancreasinedbyimmunohistochemistryandreversetranscriptasepolymerasechainreactionmethod(RT-PCR),respectively.ResultsTheNOlevelandtheactivityoftotaliNOSinthepancreasat6hsignificantlyincreasedintheSAPgroupasparedtothecontrolgroup(P<0.01).ImmunohistochemistryandRT

5、-PCRalsorevealedanincreaseintheexpressionofpancreaticiNOSproteinandmRNAinthepancreas(P<0.01).Eachparameterincreasedeandreachedthepeakat12handstillretainedahighlevelat24h(P<0.01).ConclusionInSAP,theiNOSexpressioneandthusthehighconcentrationofNOa公司)，NO检测试剂盒(南京建成生物工程研究所)，iNOS免疫组化试剂盒(北京

6、中杉金桥生物技术有限公司)，TIANScriptM-MLVRT-PCR试剂盒(上海捷瑞生物公司)，iNOS及β-actin引物合成由上海生工生物工程技术服务有限公司完成。全自动生化分析仪(美国Vitros公司)。　　1.3方法　　1.3.1动物分组及SAP模型制备36只大鼠随机分为2组。SAP组(n=18)：采用Aho法[1]，逆行胰胆管注射5%牛磺胆酸钠(0.1ml/100g)制备SAP模型;对照组(n=18)：处理方法同SAP组，以等量生理盐水替代5%牛磺胆酸钠。于制模成功后第6、12、24h，每组分别随机选取6只大鼠，予以牵拉颈部处死。心脏穿刺抽血，血清存于-20℃

7、冰箱中保存备检;从胰腺相同位点分别取胰腺组织立即放入液氮中，2h后转入-70℃冰箱中保存;部分胰腺组织用10%中性甲醛固定24～48h，常规脱水、包埋。　　1.3.2血清淀粉酶的测定用全自动生化分析仪，采用碘比色法测定血清淀粉酶。　　1.3.3胰腺组织病理学观察胰腺组织常规浸蜡、包埋，3μm厚度切片，苏木精-伊红染色。光镜下(×100)每张切片随机选取10个高倍镜视野，从水肿、感染、出血和坏死4个方面评价胰腺组织损伤的程度。参考Kusske标准[2]，由2位专业病理医师双盲阅片;各项最低分为0，最高分为4分;取各项积分总和为最