一种新型海洋来源的蒽环类化合物d19抗肿瘤活性及机制研究

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1、一种新型海洋来源的蒽环类化合物D19抗肿瘤活性及机制研究：袁洁,何振健,吴珏珩,朱勋【摘要】目的探讨新型海洋源性蒽环类化合物D19的抗肿瘤作用及分子机制。方法采用四甲基二氮唑蓝(MTT)比色法、脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)、免疫印迹法(CF-7和MDA-MB-435生长的影响及相关信号通路蛋白的变化。结果D19对MCF-7、MDA-MB-435的半数抑制浓度(IC50)分别为4.01μmol/L和7.32μmol/L;D19具有有效诱导人乳腺癌细胞凋亡的作用;ethodsTheinhibitoryeffectsofD19

2、ongroinedbyMTTassay.Themolecularsignalingpatheasuredbyterminaldeoxynucleotidyltransferase(TDT)-mediatedbiotinylateddeoxyuridine-triphosphate(dUTP)-biotinnickendlabeling(TUNEL)stainingandol/Land7.32μmol/Lrespectively.TUNELstainingshoeapoptosisproteinssuchascaspase9andPARPbeingc

3、leavedaftertreatmentightbeusedasapromisingchemotherapeuticalagentforpatientsarinemensalmicroorganism;antineoplastic;anthracycline;humanbreastcancercells;apoptosis　　长期以来，恶性肿瘤一直严重威胁着人类健康与生命。据世界卫生组织统计，全世界每年约有600万人被癌症夺去生命，估计到2020年将升至1000万人[1]。其中乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，而且是实体瘤中应用化疗最有效的肿瘤之一

4、。因此寻找有效的抗肿瘤化合物对于乳腺癌的治疗具有重要的意义。蒽环类化疗药物是目前临床应用广泛的抗肿瘤一线化疗药物，尤其是乳腺癌化疗中最常用的药物，但是此类药物仍存在骨髓抑制性、心脏毒性问题，以及肿瘤患者长期使用出现的多耐药现象，大大限制了其剂量提高和临床治疗效果[2-4]。因此，有必要寻找更好的同类化疗替代药物[5]。本文从分子水平和细胞水平对海洋微生物的蒽环类化合物D19抗人乳腺癌作用进行了研究，为该化合物最终成为抗肿瘤药物提供理论依据，并为进一步开发高效低毒的抗肿瘤新型候选药物奠定基础。　　1材料与药物　　人乳腺癌细胞系MDA-MB-435、M

5、CF-7为本实验室保存，并已在本实验室已发表的其他研究项目中使用[6]。D19由中山大学化学与化学工程学院林永成教授提供[7]。各种化合物由二甲基亚砜(DMSO)(Sigma公司)制备保存母液。　　2方法　　2.1细胞培养　　人乳腺癌细胞系MCF-7、MDA-MB-435培养于含5%(φ)胎牛血清(Hyclone公司)、2mmol/LL-谷氨酰胺、0.1mmol/L非必需氨基酸、10mmol/LHepes(缓冲液)、100IU/mL青霉素和100μg/mL链霉素的DMEM完全培养基中(以上细胞培养相关试剂均为Invitrogen/Gibco公司产品

6、，购自Invitrogen公司)，置于37℃5%(φ)CO2孵箱中孵育培养。传代时用含0.02%EDTA的0.05%(φ)胰酶消化，以DMEM完全培养基终止消化。　　2.2四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色实验　　将MCF-7和MDA-MB-435细胞消化后计数，按每孔1.0×104个细胞分别接种至96孔细胞培养板中，置于37℃5%CO2孵箱中孵育培养。24h后更换为含浓度依次为0、0.001、0.05、0.1、0.5、1、2、3、4μmol/LD19的培养基，每个浓度均设3个平行复孔，继续培养48h后，显微镜下观察细胞形态及生长的变化。随后每孔加入质量

7、浓度为5mg/mLMTT(Genvieg/mL，过滤除菌，分装后-20℃避光保存)溶液20μL，37℃作用4h，离心后弃上清液，加入DMSO150μL，振荡器振荡10min充分溶解结晶，置酶标仪上测定波长为490nm下的吸光度A值，按以下公式计算抑制率。细胞生长抑制率(%)=(对照组平均A值-实验组平均A值)/对照组平均A值×100%。对照组即D19浓度为0的培养孔。使用半数抑制浓度(IC50)计算软件Bliss’ssoftol/LD19处理细胞。将50μLterminaldeoxynucleotidyltransferase(TDT)反应缓冲液加

8、至细胞上，将培养板置于湿盒中于37℃避光反应60min。吸弃反应液，加入2×SSC室温作用15min，用PBS洗涤3次，每