vwf和hdac1在胃癌细胞株bgc823中的表达及对细胞粘附侵袭迁移能力的影响的论文

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1、vWF和HDAC1在胃癌细胞株BGC823中的表达及对细胞粘附侵袭迁移能力的影响的论文作者：王敏，刘伟，杨爱军，王晨昱，李敏【摘要】目的：研究血管性血友病因子（vtt）法检测对细胞外基质成分ⅳ型胶原粘附能力的变化；boyden小室法检测细胞侵袭、迁移能力的改变.结果：bgc823细胞能够表达vrna相对含量由处理前的0.2134增加到0.3214，v:toinvestigatetheexpressionsandeffectsonadhesion,invasionandmotilityofv

2、onangastriccancercelllinebgc823invitroandtherelatedmechanismofantimetastasis.methods:humangastriccancercelllinebgc823culturedinvitromunocytochemistry.theeffectsofvotilityofhumangastriccancercelllinebgc823invitrottcolorimetricassayandboydenchamber

3、.results:thehumangastriccancercelllinebgc823expressedventrnainbgc823about0.2134to0.3214,andtheexpressionofvotility(60.47±16.20)abilitiesofthebgc823cellsentangastriccancercelllinebgc823canexpressvportantpartintheadhesion,invasionandmotilityofthebg

4、c823cells.　　【keyachneoplasms;cellline,tumor;vmetastasis　　0引言　　血管性血友病因子（voni1640（美国gibco公司）；胰酶(美国amresco公司)；超级新生牛血清（fbs）（杭州四季青生物工程有限公司）；ⅳ型胶原（兰州大学病理研究所自制）；四甲基偶氮唑蓝（mtt）及牛血清白蛋白（bsa）（美国sigma公司）；兔抗人v公司）；兔抗人hdac1多克隆抗体（ba0914）及sp免疫组化试剂盒（武汉博士德生物工程有限公司）；triz

5、ol试剂、rtpcr两步法试剂盒及焦碳酸二乙酯(depc)（上海生物工程有限公司）；目的基因、内参引物及marker（d512a）（takara）；博伊登(boyden)小室与多聚碳酸酯膜(8.0μm孔径)（美国millipore公司）；人胃癌细胞株bgc823（中国科学院上海细胞生物研究所）.　　1.2方法　　1.2.1细胞培养用含100ml/l灭活新生牛血清的rpmi1640培养液（含105u/l青霉素、100mg/l链霉素）在37℃50ml/lco2及饱和湿度的培养箱中维持培养.　　

6、1.2.2sp法免疫细胞化学染色取对数生长期bgc823细胞，消化离心后，将细胞悬液加入已预置无菌小玻片的12孔板中，每孔含细胞2×104个，培养36h后，取出盖玻片，pbs洗3次，4℃无水乙醇固定.免疫组化参照试剂说明书进行，苏木精轻度复染，脱水透明，显微镜下观察结果.pbs代替一抗做阴性对照.判断标准：hdac1以细胞核呈清晰棕黄色颗粒为阳性细胞，vl/lco2条件下培养48h后检测vrna及hdac1mrna表达；vlvrna表达；hdac1ab处理组：用10μg/mlhdac1ab作用

7、细胞48h后，检测vrna表达.　　1.2.3.2两步法rtpcr用trizol试剂提取细胞总rna，参照amv第一链cdna合成试剂盒说明书操作合成cdna，以oligodt为引物反转录，vin,94℃30s,52℃40s,72℃50s,共循环36次后72℃延伸5min；hdac1为94℃变性4min,94℃30s,54℃40s,72℃50s，共循环45次后72℃延伸5min.扩增产物进行1.5g/l琼脂糖凝胶电泳，电泳图像经凝胶成像扫描仪分析，比较vlvlhdac1ab加入rpmi16

8、40培养基中，与bgc823细胞共培养48h；将96孔板预先用3g／mlⅳ型胶原20μl／孔包被，20ml/lbsa封板处理，加入调好的细胞悬液200μl／孔（5×105个／ml）；co2培养箱分别孵育30，60，90和120min后，弃去培养液，pbs冲洗除去未粘附细胞；弃pbs后加入mtt20μl，及无血清rpmi1640200μl，co2孵育3h；吸弃培养孔内上清液，加入二甲基亚砜（dmso）200μl溶解，噻唑兰显色，酶联免疫检测仪570nm处测各孔吸光度（a570nm）值，同时设立