热休克蛋白70与肝脏缺血预处理延迟保护效应论文

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1、热休克蛋白70与肝脏缺血预处理延迟保护效应论文.freel-op-eration，S组）;②缺血再灌注组（ischemicreperfusion，I/R组）;③缺血预处理组（ischemicpreconditioning，PC组）;④预处理加左旋硝基精氨酸组（preconditioning+L-NNA，PC+L组），各组再灌注后检测血清谷丙转氨酶（alanineaminotrans-ferase，ALT）及丙二醛（malondialdehyde.freelicpreconditioning;heatshockproteins;is-chemia-reperfusioninjuryAbs

2、tract:AIMToassesstheprotectionofHSP70’sandtimecourseinthepreconditioning（PC）inischemia/reperfu-sion（I/R）injuryinratliver.METHODS168SDratslydividedintofourgroups:①Sgroup:n=42，sham-operatedcontrol;②I/Rgroup:n=42，subjectedtoischemiafor70min;③PCgroup:n=42，ischemiafor5minandreperfusionfor5minfortia;④

3、PC+Lgroup:n=42，theratsinisteredL-NNA（10mgkg-1）beforepreconditioning，andtheniafor70min.Serumlevelofalanineaminotransferase（ALT）andmalondialdehyde（MDA）icaltechnique.RESULTSSerumlevelofALTandMDAofbothI/RandPC+Lgroupincreased，paredlevelofALTandMDAegraduallyhigherthanI/Rgroupduring6～48h（P0.01）.CONCLU

4、SIONNOandHSP70mightbeinvolvedintheprotectionagainstliverischemia/reperfusioninjuryandHSP70mightbeassoci-atedin，持续再灌注;③预处理后缺血再灌注组（PC组，n=42）:阻断肝门，缺血5min后再灌注5min，共重复2次后阻断肝门，缺血70min，持续再灌注;④预处理加L-NNA加缺血再灌注组（PC+L组，n=42），预处理前在门静脉注射L-NNA（10mgkg-1），然后与PC组同法，标本采集:再灌注后于0，1，3，6，12，24和48h取静脉血清及缺血部位肝脏组织标本，乙醇、

5、甲醛液固定，每个时间点均为6只大鼠，每只大鼠只限取一次标本后处死.1.3模型制备方法依照Kobayashi法建立大鼠肝脏局部缺血再灌注模型，每只大鼠手术前禁食12h，采用2gL-1戊巴比妥钠30mgkg-1腹腔内麻醉，正中剖腹，分离肝十二指肠韧带，暴露肝门部.S组不作进一步处理;所有缺血方法均为血管夹阻断门静脉进入肝脏第一次分叉以远，即阻断肝尾状叶及肝左叶血流，造成70%肝脏缺血，阻断达到所需的时间后，松开血管夹，进行再灌注.1.4指标检测1.4.1血清ALT，MDA的检测下腔静脉血2mL常温1500rmin-1离心3min，取血清，用赖氏法测定ALT活性.比色法测定血清MDA含量.1

6、.4.2肝组织热休克蛋白免疫组化染色各时间点采集的肝脏组织标本均进行热休克蛋白70（HSP70）免疫组化染色;采用生物免疫组织化学染色法，苏木素复染，高倍镜下，细胞质呈棕色着染者为HSP70蛋白表达阳性细胞，观察切片中10个具有代表性的高倍视野，计算1000个肝细胞中（100个细胞×10个高倍镜视野）染色阳性细胞数除以1000作为HSP70蛋白表达阳性率.1.4.3形态学检查剪取肝左叶组织1.5cm见方的组织块，用甲醛液固定，制成石蜡切片，进行HE染色，镜下观察组织结构.另外各组3，12和24h组织块固定后送电镜观察.统计学处理:全部数据以x±s表示，均数间比较用t检验，采用SAS统计

7、软件分析.2结果2.1各组大鼠再灌注后血清ALT及MDA变化再灌注后各个时间点I/R，PC，PC+L组血清ALT，MDA含量明显增高（P0.01vsS组）;PC组明显低于I/R组（P0.01）;PC+L组则0～3h阶段与I/R组无显著差异（P0.05），6～48h阶段则显著低于I/R组（P0.01），但仍高于6～48h阶段的PC组（P0.05，Tab1）.表1再灌注后大鼠血清ALT及MDA变化略2.2免疫组化染色结果各组染色结果见Tab2:可见