支气管上皮细胞和嗜酸粒细胞的不同培养方式对il

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1、支气管上皮细胞和嗜酸粒细胞的不同培养方式对IL王成彬，黄振国，叶伟基，李洛谊，鲍依稀，童红莉，田亚平，林伟基【关键词】支气管；上皮细胞；嗜酸细胞；白细胞介素【Abstract】AIM:ToinvestigatetheeffectofdifferentculturesystemsonIL6releaseinmodelofcocultureofhumanbronchialepithelialcellsandeosinophils.METHODS:Humanbronchialepithelialcellsandeosino

2、phils.IL6releaseindifferentculturesystemsofbronchialepithelialcellsandeosinophilsinedbyenzymelinkedimmunosorbentassay(ELISA).RESULTS:paredofIL6inculturesupernatantsofbronchialepithelialcellsandeosinophilsalone,IL6releaseexhibitedasynergisticeffectsincocultureof

3、thetbersbythescreen,thatcouldsustaintheculturesupernatantacross〔(107±10)ng/Lvs(388±40)ng/L,P0.001〕.ButIL6releaseincocultureofthetledtoasignificantelevationofIL6releaseparedanbronchialepithelialcellsandeosinophilscanbeactivatedtoreleaseIL6bycontactingeachotheran

4、dmediatorsthattheyreleasedincoculture.【KeyLPercoll原液(密度1.130kg/L,瑞典Amersham公司产品)，15mL1.5mol/LNaCl和47.1mL去离子水；抗CD16抗体磁珠和细胞磁性分离系统（MACS）购自德国MiltenyiBiotec公司；Matrigel和细胞转膜插槽（孔径0.4μm）购于美国BD公司；IL6ELISA测定试剂盒购于美国BioSource公司，新鲜人全血由香港红十字会输血服务中心提供.1.2方法1.2.1嗜酸粒细胞的分离新鲜人全血通

5、过密度为1.082kg/LPercoll溶液离心分层，去除淋巴细胞层后用冰浴去离子水裂解红细胞，所剩嗜中、酸粒细胞与抗CD16抗体磁珠反应使细胞表面带有CD16蛋白质的嗜中粒细胞与磁珠结合.当嗜中、酸粒细胞混悬液通过磁性分离柱时，由于磁性作用使结合在磁珠上的嗜中粒细胞吸附于分离柱上，而表面不表达CD16的嗜酸粒细胞则可顺利通过分离柱.分离后的嗜酸粒细胞用伊红染色鉴定其纯度，计数并调整到适当浓度，再悬浮于含100mL/L小牛血清的RPMI1640细胞培养液中待用.1.2.2BEAS2B细胞的培养BEAS2B细胞置于含1

6、00mL/L小牛血清的DMEM/F12细胞培养液中，37℃,50mL/LCO2孵育.1.2.3BEAS2B细胞与嗜酸粒细胞接触共培养待BEAS2B细胞贴壁生长到形成单层（1.5×105），将细胞培养液换成含1×106嗜酸粒细胞加有100mL/L小牛血清的RPMI1640细胞培养液共培养.1.2.4BEAS2B细胞与嗜酸粒细胞分隔共培养待BEAS2B细胞贴壁生长到形成单层（1.5×105），细胞培养液换成含有100mL/L小牛血清的RPMI1640培养液，将带有细胞分隔膜的插槽（膜孔径0.4μm，可阻止嗜酸粒细胞通过膜

7、进入下层培养池与BEAS2B接触，但不影响细胞培养液及细胞代谢产物交换）置入细胞培养孔中将之分隔成上、下两个细胞培养池，加入1×106嗜酸粒细胞到上层培养池与BEAS2B细胞分隔培养.1.2.5BEAS2B细胞与嗜酸粒细胞在Matrigel中共培养触合的BEAS2B细胞（1.5×105）与1×106嗜酸粒细胞在Matrigel中共培养.1.2.6细胞培养上清液的收集将嗜酸粒细胞和BEAS2B细胞分别或共培养15h，收集培养上清液，510g,4℃离心10min，分离无细胞上清液并立即置于-80℃保存.1.2.7IL6的

8、测定细胞培养上清液中IL6用ELISA方法定量.统计学处理：所有实验均重复3次（n=3），数据用x±s表示，两种细胞在不同培养体系中所释放IL6量的比较应采用方差分析，并用SPSS统计软件进行处理.P0.05表示差异有统计学意义.2结果2.1嗜酸粒细胞与支气管上皮细胞不同方式的共培养BEAS2B细胞贴壁生长到融合后加入嗜酸粒细胞与其共培养，嗜酸