金丝小枣多肽的提取及生物活性的研究

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1、金丝小枣多肽的提取及生物活性的研究第1章绪论1.1枣的简介枣（ZizyphusJujubaMill），又名中华大枣，是我国最古老的果树之一[1],，红枣即可作为食用，又可作为药用，早在《佰华子本翰》、《《齐民要术》、名医别录》、《本草纲目》等有记载，红枣味甘性温，长期食用可美容养颜、通气血、延年益寿等作用[2]。民间流传每天吃仨枣，一辈子不见老的说法。我国的红枣培植历经千百年，品种多达300余个，其中以山东乐陵、庆云等地金丝小枣最负盛名。作为金丝小枣的发源地，这里地理环境优越，气候适宜，日光照射时间长，昼夜温差大，是枣树生长的最佳环境。小枣皮薄肉厚

2、，香甜可口，营养丰富。金丝小枣含糖量较高，氨基酸、生物碱等含量较多[3]。研究表明，金丝小枣具有重要的抗补体活性，增强机体免疫力[4,5]。金丝小枣蛋白含有8种人体必需氨基酸，特别是含有婴幼儿不能合成的组氨酸和赖氨酸。枣多肽是枣蛋白溶液经过酶解得到的物质，组成成分与蛋白质一样，但是更容易被人体吸收，作用效果更好，可以增强人体的免疫力。研究表明在鲜枣中的Vc含量在各种水果中最高，苹果的70倍，桔子的13倍，因此被称为Vc丸，医学研究得出，在枣肉中营养价值极高的物质，如环磷酸鸟苷（cGMP）、黄酮（EGB）等物质，对一些疾病如癌症及心血管病的预防起重要

3、作用。芦丁含量较高，据测有30mg/g左右，芦丁可强化VC的功能，降低体内血脂胆固醇；有维持毛细血管正常抵抗能力和降低通透性和脆性的作用，可预防毛细血管发脆引起的出血症，因此常用于高血压、败血症、胃病、皮肤病等疾病的辅助治疗[6,7]。1.2生物活性肽生物活性肽是指具有特殊生物活性的多肽。在蛋白质的空间结构中具有生物活性的多肽类，通过相应的酶解，可将其释放出来，单独从蛋白链中释放片断，可显示出独特的生物活性，形成的生物活性肽[8]。生物活性肽具有丰富的生物学功能，如降胆固醇、改善元素吸收和矿物质运输、免疫调节抗衰老、抗血栓、抗高血压、激素作用、促进

4、生长、抑制细菌和病毒、抗癌抗氧化、调节口味和硬度、食品风味等[9,10,11,12]。所以，生物活性肽是选药物、制疫苗及食品添加剂的天然资源库[13]。血管紧张素转换酶（ACE）可使血管紧张素A转换为血管紧张素磅B,因而末端血压收缩，对血管病的患者有显著作用，同时也正常人可作为一种保健品。1970年，FerreiraSH[14]等首先从蛇毒中发现了降血压活性肽ACE，后陆续从其他物质中得到了具有降血压的生物活性肽。这种降血压肽肽链短，可降低血管紧张素酶的活性，不易被消化道的酶分解，因此可作为一种重要的口服保健品。.第2章复合酶制备枣多肽的研究2.1

5、验材料与设备在金丝小枣汁浓缩的实际生产中，经过浸提、打浆、酶解、离心、分离来获得枣汁和枣皮，超滤枣汁，透过液通过浓缩即浓缩金丝小枣汁，而截留液却浪费掉。截留液中含有蛋白质和多糖。金丝小枣截流液是生产金丝小枣生产浓缩栆汁的副产物，截流液中的蛋白质营养价值高，且氨基酸组成比较齐全，是营养丰富、物美价廉的纯天然植物性蛋白源。目前，国内研究酶解利用主要集中在植物蛋白如大豆蛋白、麦胚蛋白等和牛、鱼、鸡蛋白等动物蛋白上，但研究酶解金丝小枣蛋白的较少。本课题采用酶法制备枣多肽。通过对枣蛋白的复合酶解技术，得到小分子活性肽，使枣蛋白资源得以合理开发利用，提高其加工

6、的综合效益及经济附加值，为枣多肽的生产提供依据。活性炭、葡萄糖、苯酚、浓H2SO4、氢氧化钠、盐酸、三氯乙酸、乙醇、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、氢氧化钠等药品；凝胶层析所用的标准物质肌球蛋白（F3）（2500Da）、维生素B12（分子量1355Da）、氧化型谷胱甘肽（600Da）、还原型谷胱甘肽（300Da）（上海伯奥生物科技有限公司）；DPPH、D2-脱氧核糖、邻苯三酚、三羟甲基氨基甲烷（Tris）、EDTA、硫酸亚铁（FeSO4）。.2.2实验方法水解度的测定采用TCA法[28]。首先，在枣蛋白酶解过程中适时取样，每次5mL，并加入等量的10%三氯

7、乙酸；然后，在6000r/min的条件下离心15min，取上清液，用凯氏定氮法测可溶性氮的含量。取金丝小枣浓缩枣汁截留液离心，8000r/min，时间为10分钟，取上清液，用旋转蒸发仪浓缩到一定程度，将溶液调制所需的温度、pH及底物浓度等，在加酶的过程中，添加所需酶时需低速搅拌，使酶与底物充分接触，反应过程中需添加氢氧化钠或盐酸来控制反应的pH值，定时取酶解液，运用TCA法测定定水解度，凯氏定氮法测多肽含量。反应结束后，将酶解液迅速升温至95℃,10分钟，灭酶。将酶解液通过1000Da、500Da的纳滤膜分级，取透过液经冷冻干燥便得到不同分子量分布

8、的枣多肽。选择酸性蛋白酶、植物蛋白酶、木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶、中性蛋白酶在各自理论最适条件下酶解金丝小枣枣蛋白，