马尾松花粉多肽提取及其生物活性研究

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1、山东师范大学硕士学位论文马尾松花粉多肽提取及其生物活性研究姓名：肖宁申请学位级别：硕士专业：细胞生物学指导教师：耿越20090525山东师范大学硕_i：学位论文马尾松花粉多肽提取及其生物活性研究中文摘要松花粉是一种营养十分丰富的天然资源，近年来对其中的脂肪酸和多糖类物质进行了大量研究，但对超过10％含量的蛋白研究甚少。蛋白质是生命中的基本物质，而多肽是蛋白质的分解产物。活性多肽具有降低血压、延缓衰老、抗氧化、保肝、美体养颜、抗疲劳、改善睡眠、增强记忆、抑制肿瘤、增强免疫、促进人体对蛋白质及各种有益微量元素的吸收等多种功效，其开发

2、应用是当前生物工程领域的热门课题，所以松花粉中活性多肽的提取是一项非常值得研究的课题。本实验的旨在从马尾松花粉中分离纯化出一种活性多肽，对其生物活性进行研究，为全面利用马尾松花粉奠定基础。本实验以马尾松花粉为研究材料，通过浸提时间、浸提料液比、浸提pH和盐浓度等单因素条件进行优化，以盐析、透析、离子交换层析、凝胶过滤层析和高效液相色谱等方法从马尾松花粉中提取出生物活性多肽，并对其进行蛋白含量测定、紫外线全波长扫描、体外抑制肝癌细胞HpG2和刺激脾脏细胞增殖等方面进行了分析。主要获得了以下结果：1、马尾松花粉中的蛋白质以碱溶谷蛋白

3、为主，占花粉浸出总蛋白的60％以上，这和其他的蜂花粉有明显不同，是组成花粉浸出蛋白的主要成分。2、通过单因素实验分析确定了马尾松花粉蛋白的最佳提取条件为：料液比为1：20，浸提时间4h，浸提次数3次，pH值为8，浸提温度保持4℃，且不需要添加其它盐离子。3、硫酸铵分级沉淀的过程中，通过各个饱和度的摸索，确定了0．60％、60—80％和80一100％=个沉淀组分，其中0—60％组分占总沉淀蛋白量的50％以上，这个组分作为实验的主要组分。4、两次SephadexG25色谱之后，得到一个较纯的峰，命名为主峰G2，对G2进行HPLC半制

4、备得到3个峰，分别命名为G2HI、G2H2和G2H3。三个组分中的G2H2具有220nm和280nm两个最大吸收峰，G2H3的纯度达到90％以上。5、透析外液经过SephadexG25色谱层析之后，得到一个分子量较大的峰，命名为G10，此蛋白SDS．PAGE上显示单一条带，表观分子量16KD。6、纯化的组分G10、G2H1、G2H2和G2H3在200lag／mL时均可以刺激脾脏淋巴细胞的增殖，促增长率分别是46．10％、29．81％、39．73％、和14．84％，其中G2H1有极显著刺激作用(P

5、(P

6、tyAbstract：Pinepollencontainsawiderangeofnutrition．TherearemultipleresearcheshavebeendoneonfattyacidsandcarbohydratesinPinepollen，buttheresearchesonproteinswhichhasmorethan10％contentareveryfew．Proteinsarethebasicmaterialoflife，andpeptidesareaproductofproteindecomposi

7、tion．Activepeptideshavemanyfunctions，suchas，deducebloodpressure，anti—aging，antioxidant，anti—fatigue，enhancememoryandpromotethehumanbodytoabsorbusefulproteinandmanybeneficialmicroelements．Ithasbecomeahottopicinthefieldofcurrentbioengineering，SOitisveryworthtoresearch．

8、ThepurposeofthisexperimentistOextractandpurifyakindofactivepeptideandresearchforitsbioactivities，inordertomakefulluseofPinepollen．W