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时间:2018-07-06
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1、近远端胆管恶性肿瘤致梗阻性黄疸对比研究【摘要】目的研究近远端不同部位的胆管恶性肿瘤所导致的梗阻性黄疸肝脏不同病理改变。方法选择近端胆管恶性肿瘤导致梗阻性黄疸67例,远端胆管恶性肿瘤所致梗阻性黄疸54例,手术留取未解除梗阻时的肝脏病理标本,采用免疫组化的方法显示TNF在肝脏中的表达,同时采用Sample-pci图像分析系统进行半定量分析。结果TNF免疫组化染色显示肝脏细胞中存在大量阳性细胞,阳性细胞半定量分析可见,远端胆管恶性肿瘤梗阻性黄疸光密度值明显高于近端胆管恶性肿瘤梗阻性黄疸光密度值。结论TNF是梗阻性黄疸中重
2、要的致病因子,其在梗阻性黄疸肝脏中的表达程度与梗阻部位有密切关系。【关键词】梗阻性黄疸;TNF;免疫组化;半定量分析parativeStudyofObstructiveJaundiceCausedbyDifferentPartsofCarcinomaofBileDuctethodsImmunohistochemistryshople-pciimageanalysissystemforsemi-quantitativeanalysis.ResultsTherearelotsofpositivecellsinimmun
3、ohistochemistryandtheopticaldensityisdifferentbeta.ConclusionsTNFistheimportantpathogenicfactorinobstructivejaundiceandiscloselyrelatedtothedegreeofobstructionsite. Keymunohistochemistry;semi-quantitativeanalysis 梗阻性黄疸(ObstructiveJaundice,OJ)是肝胆外科中常见的疾病,可对机体
4、多个脏器产生损害,其致病机理涉及多种细胞因子与化学因子的参与,近几年研究表明,TNF-α是导致肝脏病理改变的关键因素。本研究通过观察不同部位梗阻性黄疸中TNF的表达情况,并探讨其机制从而指导临床工作。 1材料和方法 1.1材料 1.1.1标本收集潍坊市人民医院20002009年梗阻性黄疸手术病人未解除梗阻时肝脏标本121例,胆总管近端梗阻67例,男性45例,女性22例,年龄52~79岁,平均年龄62.3岁,临床表现无痛性进行性黄疸,尿黄,大便发白,术前总胆红素为171~328μmom/L,平
5、均257μmom/L;胆总管远端梗阻54例,男性36例,女性18例,年龄48~78岁,平均年龄59.1岁,临床表现无痛性进行性黄疸,尿深黄,陶土样便,术前胆红素201~471μmom/L,平均313μmom/L。 1.1.2试剂鼠抗人TNF-α单克隆抗体购自北京中山生物技术有限公司,DAB显色试剂盒购自福州迈新生物技术开发有限公司。 1.1.3仪器Sample-pci图像分析系统,产自美国,OLYMOUS,BX50,PM-20,产自日本。(责任编辑:编辑04) 1.2方法 1.
6、2.1免疫组织化学检测 常规二甲苯脱蜡,TNF-α采用胰酶修复。每张切片加内源性生物素阻断试剂盒中的试剂A和B,新配制的3%H2O2甲醇溶液孵育10分钟,以阻断内源性过氧化物酶活性。0.5%小牛血清白蛋白封闭非特异性抗体,加入一抗和二抗及链霉菌生物素蛋白过氧化酶。DAB溶液显色,常规脱水、透明,中性树胶封片。所用PBS为10mM、pH7.4。 1.2.2结果的观察判定及统计分析 用免疫组织化学方法染色显示肝组织细胞TNF-α的表达情况;并用Sampl-PCI图象分析系统进行半定量分析。
7、所得数据利用SPSS10.0统计学软件进行两个独立样本的t检验。下载论文 2结果 实验所见:大量染色阳性细胞主要位于肝小叶周边部、肝血窦(内皮细胞),TNF-α主要在肝细胞胞浆里表达,部分浸润胆管区细胞,肉眼可见远端梗阻标本染色浓度高于近端染色浓度,SamplPCI图像分析系统进行免疫阳性细胞半定量分析,远端组平均光密度值高于近端组,差异有显著性(P=0.000),见表1。表1TNF-α免疫组化染色的OPTDM值结果 3讨论 梗阻性黄疸是一种多因素共同作用的结果,其可损害多种器官,多
8、种组织的正常生理功能,最终导致多器官功能衰竭,肝脏是梗阻性黄疸中最易受到损害的器官,随着梗阻时间延长,肝细胞损害加重,究其原因可能由于:(1)肝脏胆汁淤积、胆盐、高胆红素对HC的毒性作用;(2)肠道胆盐缺乏,清除LPS能力下降对HC造成损伤;(3)胆道高压造成肝脏微循环障碍,HC缺血、缺氧及脂质过氧化损伤;(4)OJ时,肝脏细胞因子间的动态平衡严重失调[1]
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