血管紧张素(17)对转化生长因子β1诱导的大鼠肾小球系膜细胞增殖的影响

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1、血管紧张素(17)对转化生长因子β1诱导的大鼠肾小球系膜细胞增殖的影响：贺红焰何进,李隽,王明勇,刘建【摘要】目的:研究血管紧张素(17)［Ang(17)］对转化生长因子β1(TGFβ1)诱导的大鼠肾小球系膜细胞（GMC）增殖的影响并初步探讨其机制。方法:采用C增殖（P<0.05）;同时,Ang(17)对TGFβ1诱导的系膜细胞内Smad3,Smad7基因mRNA表达有明显的抑制作用（P<0.05）。结论:Ang(17)对TGFβ1诱导的系膜细胞增殖有抑制作用,其机

2、制可能是通过下调细胞内信号传递分子Smad3/7的表达。【关键词】系膜细胞;血管紧张素(17);转化生长因子β1;细胞增殖;Smad3/7转化生长因子β1(transforminggroatrix,ECM)合成和分泌、改变基质降解酶及其抑制因子的表达量和活性等。肾小球系膜细胞(GMC)是肾小球内一种固有的血管外周细胞,大量实验研究证实,该细胞的异常增殖在肾小球病变进展过程中起着重要的作用,而TGFβ1对GMC具有明显的促增殖作用。血管紧张素(17)［Angiotensin（17）,An

3、g(17)］是肾素血管紧张素家族中被新认识的一个重要成员,国内外大量的实验以及我们既往的研究均证实Ang(17)可抑制AngⅡ、内皮素1等多种因素引起的包括GMC在内的多种细胞增殖以及ECM的分泌［1,2］,但它对TGFβ1所诱导的GMC增殖的影响尚无相关报道。我们研究Ang(17)对TGFβ1诱导的大鼠系膜细胞增殖及其对细胞内信号传递分子Smad3/7的影响,旨在探讨Ang(17)对肾脏纤维化的影响及可能的作用机制,为慢性肾脏疾病的防治提供新的思路和理论依据。1材料和方法1.1

4、材料大鼠肾小球系膜细胞购自武汉大学保藏中心;Ang(17)、TGFβ1均购自美国Sigma公司;C的培养复苏细胞后将其加入RPMI1640培养液,接种于培养瓶中,放入培养箱中。至细胞长至亚融合状态．用2.5g/L胰酶消化,传代,取生长旺盛的细胞做实验。1.2.2I1640培养液制成（5～10）×107/L的细胞悬液,接种在96孔板中,每孔加入细胞悬液100μL,无血清培养24h,使其生长同步化,当细胞生长融合至70%左右时加入干预因素,药物干预24h后,每孔加入C总RNA,逆转录为cDNA后进行P

5、CR反应。扩增大鼠Smad3的引物序列为:上游引物:5′ACAGCATGGACGCAGGTTCT3′,下游引物:5′TCACTGAGGCACTCCGCAAA3′,扩增片段长337bp;扩增大鼠Smad7的引物序列为:Smad7上游引物:5′GGAGTCCTTTCCTCTCTC3′,下游引物:5′GGCTCAATGAGCATGCTTCAC3′,扩增片段长125bp,扩增大鼠βactin上游引物:5′CCTTCCTGGGCATGGAGTCCTG3′,下游引物:5′GGAGCAATGA

6、TCTTCATCTTC3′,扩增片段长205bp）,PCR反应共35个循环,取产物15μL于15g/L琼脂糖凝胶中电泳,用凝胶成像扫描及分析系统,测定目的基因与内参基因的积分光密度比值,用ＳＰＳＳ软件进行分析。1.2.4实验分组(1)对照组（A组）:不加入任何干扰因素;(2)TGFβ1作用组（B组）:在培养液中加入TGFβ1（终浓度5μg/L）;(3)Ang(17)组（C组）:在培养液中加入Ang(17)（终浓度10-6mol/L）;(4)TGFβ1+Ang(17)组（D组）:浓度同上

7、。每组均为5个样本,在96孔板中培养。药物干预时间均为24h。1.2.5统计学分析实验结果用x±s表示,采用单因素方差分析（F检验和q检验）进行组间比较,P<0.05表示差异有统计学意义。采用SPSS13.0软件进行统计学分析。2结果2.1Ang(17)对TGFβ1诱导GMC增殖的影响与对照组相比,TGFβ1（5μg/L）可明显促进GMC增殖(P<0.05);Ang(17)（10-6mol/L）明显抑制GMC增殖(P<0.05);同时Ang(17)组+TGFβ1的促细

8、胞增殖作用也有明显抑制作用（P<0.05,表1）。表1Ang(17)对TGFβ1诱导GMC增殖的影响2.2Ang(17)对TGFβ1诱导的肾小球系膜细胞smad3基因表达的影响图1为smad3基因mRNA表达量变化的电泳图。经过凝胶成像分析,与对照（A）组相比,B组TGFβ1（5μg/L）可明显促进GMCSmad3mRNA的表达(P<0.05);C组Ang(17)（10-6mol/L）明显抑制Smad3mRNA