脱氢表雄酮对实验性自身免疫性神经炎大鼠细胞免疫的影响

《脱氢表雄酮对实验性自身免疫性神经炎大鼠细胞免疫的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、脱氢表雄酮对实验性自身免疫性神经炎大鼠细胞免疫的影响【摘要】目的:探讨脱氢表雄酮（DHEA）对实验性自身免疫性神经炎（EAN）大鼠细胞免疫反应的影响。方法:　21只Leg治疗组、2mg治疗组和对照组,治疗组于注射牛周围神经髓磷脂（BPM）抗原乳剂后第5天开始每日皮下注射DHEA,对照组皮下注射相同体积的DHEA溶媒。疾病高峰期检查坐骨神经IFNγ、TNFα阳性反应细胞,检测引流淋巴结和脾脏单个核细胞增殖反应,检测培养上清TNFα、IFNγ、IL10含量。结果:两种剂量DHEA治疗组均能减少坐骨神经IFNγ、TNFα阳性反应细胞数目(P<0.05),抑制BPM刺激T淋巴细

2、胞增殖(P<0.05),降低培养上清中IFNγ、TNFα水平(P<0.05)。各组间IL10水平差异无统计学意义（P>0.05）。结论:DHEA可抑制EAN大鼠自身反应性T淋巴细胞增殖和促炎性细胞因子过度表达,抑制细胞免疫反应。【关键词】脱氢表雄酮神经炎实验性自身免疫性细胞免疫　　脱氢表雄酮（dehydroepiandrosterone,DHEA）是3种肾上腺皮质类固醇之一,是雌激素和雄激素的前体物质,也是目前尚不明确的多种免疫调节性类固醇的前体物质。体内、外研究证实DHEA及其代谢产物具有抗炎、抗增殖和免疫调节活性,对人和动物的免疫系统可产生有益的作用［1］。DH

3、EA能改善病毒、细菌或其他感染实验动物的存活率［2］;尘螨诱导的变应性气道疾病小鼠服用DHEA,可降低支气管灌洗液中嗜酸细胞数目,降低IL4、IL5、IFNγ和IgE水平［3］;超生理浓度的DHEA可抑制T细胞受体介导的体外T淋巴细胞增殖,使KLH致敏脾脏细胞IL4生成增加、IFNγ水平下降［4］;系统性红斑狼疮患者服用DHEA治疗,表现出明显的病情改善,对糖皮质激素治疗需求量减少［5］。上述研究提示DHEA影响细胞和体液免疫应答。实验性自身免疫性神经炎（experimentalautoimmuneneuritis,EAN）是CD4+T细胞介导的外周神经自身免疫性脱髓鞘疾病,是公

4、认的研究格林巴利综合征（GBS）的经典动物模型,目前国内外尚未见有DHEA影响EAN免疫反应的报道。基于以往体内外研究证实的DHEA对免疫系统的作用,我们应用DHEA干预发病初期EAN大鼠,观察对细胞免疫反应的影响,以探讨治疗GBS的新方法。　　1材料和方法　　1.1材料DHEA、二甲基亚砜、弗氏不完全佐剂均购自SigmaAldrich公司;H37Ra株热灭活结核杆菌、植物血凝素（PHA）购自Difco公司;免疫组化用一抗购自R＆D公司,二抗购自Invitrogen公司;Ficocl淋巴细胞分离液、RPMI1640培养液、胎牛血清均购自Gibco公司;3H甲基胸腺嘧啶核苷购自中国原子

5、能研究所;酶联免疫分析试剂盒购自BenderMedSystem,Inc公司。超速离心法自牛脊神经根提取周围神经髓磷脂（bovineperipheralmyelin,BPM）;Leg/剂治疗组（T1）、2mg/剂治疗组(T2)和对照组(C),每组7只。大鼠经适应性饲养1周（SPF级）,氯胺酮（10mg/kg）麻醉,将BPM、H37Ra株热灭活结核杆菌和生理盐水制成混悬液,与等量弗氏不完全佐剂充分乳化,100μL抗原乳剂（含BPM5mg、结核杆菌1mg）注入双侧后肢足垫皮下。自免疫后第5天开始皮下注射DHEA,体积50μL,每日1次。对照组每日皮下注射相同体积的DHEA溶媒二甲基亚砜。　　1.

6、2.2免疫组化检查于免疫后16d（EAN高峰期）处死大鼠,取坐骨神经近脊髓段,40g/L多聚甲醛固定,石蜡包埋,纵行切片（5～6μm,每根神经2张连续切片）,常规脱蜡致水,30mL/L过氧化氢阻断内源性过氧化物酶活性,枸橼酸（pH6.0）抗原修复,100mL/L牛血清白蛋白封闭,滴加一抗室温下60min。一抗为羊抗大鼠IFNγ、TNFα多克隆抗体,二抗为辣根过氧化酶标记兔抗山羊IgG,DAB显色,苏木苏复染,脱水,透明,封固。应用计算机图像分析系统40倍物镜下采集图像,每张切片随机取5个视野,观察大鼠坐骨神经中细胞阳性反应,细胞核周围呈棕黄色的浸润炎性细胞、施万细胞、血管内皮细胞计数为

7、阳性反应细胞,取其平均值,结果以细胞数/mm2组织表示。　　1.2.3体外淋巴细胞增殖试验取免疫后16dEAN大鼠腹股沟、腘窝淋巴结和脾脏,过钢网研磨制备单个细胞悬液,Ficocl淋巴细胞分离液2000r/min,离心20min,收获单个核细胞,RPMI1640培养液冲洗3次,悬浮于含100mL/L胎牛血清的RPMI1640培养液,调整细胞密度为2×109/L,接种到96孔培养板,200μL/孔,分别加入10μLBPM(