固相萃取高效液相色谱法测定司他夫定的血药浓度论文

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1、固相萃取高效液相色谱法测定司他夫定的血药浓度论文【关键词】固相萃取法高效液相色谱法司他夫定血药浓度0引言司他夫定(stavudine)是人类免疫缺陷病毒（HIV）逆转录酶抑制剂.司他夫定被胸苷激酶磷酸化后形成有活性的代谢物三磷酸司他夫定，抑制HIV逆转录酶而干扰病毒DNA的合成，临床上用于治疗HIV感染.我们旨在摸索一种简便、快速、专属性高的测定司他夫定血浆浓度的方法，为司他夫定药动学研究提供指导.1材料和方法1.1材料高效液相色谱仪（SPD10Avp，日本岛津公司）；BF2000固相萃取系统，BondODSC18固相萃取小柱（3mL/200mg,Agilent

2、Techologies）；受试制剂：司他夫定胶囊（批号：041103；规格：每粒40mg；武汉五景药业有限公司）；参比制剂：司他夫定胶囊（批号：040601；规格：每粒20mg；纯度：99.96%；上海迪赛诺生物医药有限公司）；内标：地丹诺辛（2,3Dideoxyinosine，98%，美国SIGMA公司）；乙腈和甲醇（色谱纯.freelm×4.6mmI.D.，5μm）；流动相：乙腈0.05mol/L磷酸胺（5∶95，V/V），磷酸调pH=6.75；流速：1mL/min；检测波长：260nm［1］.1.2.2定性获取空白血浆、加入标准品的血浆样品和待测血浆样品的

3、二维色谱图，比较所测成分的保留时间及检测波长是否一致.1.2.3血浆样品的预处理取0.5mL血浆样品，加入0.5mL内标溶液（0.1mg/L），充分混合后转移至预先依次用2mL甲醇、2mL0.05mol/L磷酸胺活化过的固相萃取小柱，依次用2mL0.05mol/L磷酸胺、0.5mL去离子水淋洗，并弃去淋洗液，然后用2mL甲醇洗脱，收集洗脱液至洁净样品管中，在40℃下用氮气流吹干，残渣用0.5mL流动相溶解，取50μL进行HPLC分析.1.2.4标准曲线的制备取健康人空白血浆0.5mL数份，加入司他夫定标准品，使其浓度分别为0.02，0.05，0.1，0.2，0.5，

4、1.0，2.0mg/L，按血浆样品项处理后作HPLC分析，以待测物与内标物的峰面积比值对药物浓度进行回归，计算回归方程.1.2.5回收率与精密度考察配制含司他夫定的标准品0.05，0.5，1.0mg/L的系列血样，日内各浓度重复进样5次，日间各浓度测定1次，连续测定5d，以所测浓度与已知浓度相比，计算血样中司他夫定的相对回收率和日内、日间精密度.2结果2.1色谱分离与定性从加入标准品的血浆样品的二维色谱图可知，司他夫定和内标（地丹诺辛）分别在11.6min和8.8min出峰，比较空白血浆、加入标准品的血浆样品和待测血浆样品的色谱图，司他夫定和内标的保留时间基本一致，

5、证明定性成功.2.2线性关系回归方程：Y=3.2595X+0.0209，相关系数（r）=0.9996(n=7)，线性范围0.02~2.0mg/L.相关系数的显著性检验P＜0.001.本色谱条件下的最低检测浓度为0.02mg/L.2.3精密度与回收率血样中司他夫定的相对回收率和日内、日间精密度见表1.血样中司他夫定的相对回收率为79.5%~88.3%，日内、日间精密度小于10%，符合生物样品分析的有关要求.表1人血浆中司他夫定的精密度和回收率3讨论测定血浆中司他夫定浓度的方法有反相高效液相色谱法、衍射紫外分光光谱法［2］、高效液相质谱仪联用法［3-4］等.我们采用

6、固相萃取高效液相色谱法，实验以乙腈0.05mol/L磷酸胺（5∶95，V/V）为流动相，结果发现，流动相pH值对司他夫定和内标的出峰时间以及峰形有显著影响，调流动相pH=6.75能获得最佳效果.本实验方法简便，特异性和重现性好，准确度、精密度、灵敏度均符合要求.【