kdr sirna对乳癌细胞凋亡和nes1与runx3基因甲基化影响的论文

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1、KDRsiRNA对乳癌细胞凋亡和NES1与RUNX3基因甲基化影响的论文kdrsirna对乳癌细胞凋亡和nes1与runx3基因甲基化影响【关键词】rna干扰;mcf7细胞;血管内皮生长因子受体2;甲基化;细胞凋亡【摘要】目的探讨体外水平利用化学修饰的小干扰rna(sirna)敲减含激酶插入区受体(kdr)基因治疗乳癌的可行性和特异性。方法采用阳离子脂质体lipofectamine2000tm作为转染试剂,将针对人kdr基因的sirna转染人乳癌细胞株mcf7敲减kdr基因的表达。通过hoec

2、hst33258染色观察mcf7细胞的凋亡情况;采用甲基化特异性聚合酶链反应(msp)和逆转录聚合酶链反应(rtpcr)方法检测nes1基因和runx3基因甲基化状态和mrna的转录水平。结果靶向kdr的sirna转染mcf7细胞后可诱导细胞凋亡，nes1基因和runx3基因甲基化程度降低，出现非甲基化条带，同时mrna表达上调。结论kdrsirna在体外能逆转mcf7细胞的nes1基因和runx3基因甲基化，并诱导细胞凋亡。【关键词】rna干扰;mcf7细胞;血管内皮生长因子受体2;甲

3、基化;细胞凋亡effectsofkdrsirnaonapoptosisandmethylationofnes1andrunx3ofbreastcancercellsxuxiue,xuhongentofbiochemistryandmolecularbiology,qingdaouniversitymedicalcollege,qingdao266021,china);[abstract]objectivetoinvestigatethefeasibilityandspecificityofge

4、netherapyforbreastcancerbyusingkdrgeneexpressionthroughchemicallymodifiedsirnainvitro.methodsthesirnacf7cellsbyusingcationicliposomelipofectamine2000tmtoknockdoeasuredbyhoechst33258staining;methylationspecificpcr(msp)assayethylationstatusofnes1andr

5、unx3gene;theexpressionsofmrnaofnes1andrunx3geneerasechainreaction(rtpcr).resultssirnadirectedagainstkdrinducedtheapoptosisofmcf7,loethylation,theunmethylationappeared,and,meanrna.conclusionkdrsirnacan,invitro,reversethemethylationofnes1andrunx3,and

6、induceapoptosis.　　[keycf7cells;vascularendothelialgroethylation;apoptosis　　恶性肿瘤生长过程中，肿瘤组织内血管的再生是肿瘤组织内细胞急剧、持续性增殖的病理生理学基础。.有研究认为，含激酶插入区受体(kdr)，即血管内皮生长因子受体2(vegfr2)是血管内皮生长因子(vegf)发挥功能的主要受体，其不仅分布于组织的血管内皮细胞，也分布于部分肿瘤细胞(mcf7细胞、hl60细胞等)，对于肿瘤增殖与新血管形成起重要作用[1]

7、。rna干扰(rnai)是由双链rna(dsrna)引起的基因沉默现象，它通过降解具有同源序列的mrna而起作用，特殊设计的小干扰rna(sirna)能使靶基因发生特异性沉默[2]。前期研究显示，kdrsirna转染乳癌细胞株mcf7后可抑制细胞增殖。本研究旨在进一步探讨其对mcf7细胞凋亡的诱导作用和对抑癌基因甲基化的影响，为其应用于临床提供理论和实验依据。　　1材料和方法　　1.1材料　　1.1.1细胞株人乳癌细胞株mcf7购自中国协和医科大学基础学院细胞中心。常规培养于含体积分数0.1

8、0胎牛血清的dmem(gibco公司产品)培养液中，置于含体积分数0.05的co2、37℃饱和湿度的孵箱中培养传代。　　1.1.2主要试剂dmem培养基、lipofectamine2000tm及trizolreagent由invitrogen公司生产;amv逆转录试剂盒由bioer公司提供;细胞凋亡hoechst染色试剂盒(c0003)为beyotime公司产品;基因组dna修饰试剂盒由zymo公司提供。　　1.2sirna设计合成　　根据文献[3]确定kdrsirna序列,其正