复方二精灵多糖的分离纯化与结构的初步研究

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1、复方二精灵多糖的分离纯化与结构的初步研究程玉洁，徐玲玲，梅之南【摘要】目的从复方二精灵中分离多糖并研究其结构。方法以黄精和枸杞子为材料，经热水提取、乙醇沉淀得二精灵多糖，通过二乙氨基乙基纤维素柱、凝胶渗透柱层析分离纯化，并采用高效液相色谱、红外吸收光谱、气相色谱进行结构分析。结果得两个多糖组分2JLⅠ和2JLⅡ，2JLⅠ主要是由阿拉伯糖、木糖、半乳糖、甘露糖和葡萄糖组成，相对分子量为811000；2JLⅡ由半乳糖、葡萄糖和甘露糖组成，相对分子量为2000。结论首次从复方二精灵中提取分离出两种纯多糖，该实验方法为以后二精灵多糖的研究提供了基础。【关键词

2、】目的从复方二精灵中分离多糖并研究其结构。方法以黄精和枸杞子为材料，经热水提取、乙醇沉淀得二精灵多糖，通过二乙氨基乙基纤维素柱、凝胶渗透柱层析分离纯化，并采用高效液相色谱、红外吸收光谱、气相色谱进行结构分析。结果得两个多糖组分2JLⅠ和2JLⅡ，2JLⅠ主要是由阿拉伯糖、木糖、半乳糖、甘露糖和葡萄糖组成，相对分子量为811000；2JLⅡ由半乳糖、葡萄糖和甘露糖组成，相对分子量为2000。结论首次从复方二精灵中提取分离出两种纯多糖，该实验方法为以后二精灵多糖的研究提供了基础。Abstract:ObjectiveThepolysaccharidespo

3、undErjinglinganditsstructuresRhizomeofPolygonatumKingiarnumandFructusLycii,byhoteationcolumnchromatographyandthestructuresainlyposedofarabinose,xylose,galactose,mannoseandglucose,anditsrelativemolecularannose,anditsrelativemolecularetoextractandisolatetpoundErjingling,andtheexpe

4、rimentalmethodsprovidfoundationfortheresearchofpoundErjinglingpolysaccharideaftereofPolygonatumKingiarnum配伍组成。最早收载于《圣济总录》，具有“助气固精,补填丹田,活血驻颜,长生不老”之功效〔1〕。本课题组前期研究发现，复方二精灵多糖可显著抑制急性分离的海马神经元电压门控性钠通道电流峰值,使钠通道半激活电压向去极化方向偏移，有效阻止了海马细胞内钙积聚，在一定程度上减弱了海马细胞内钙超载所致海马细胞损伤，并可能通过阻断兴奋性谷氨酸受体，调节Bcl-2

5、、Bax蛋白的表达，有效的阻止Glu诱导的海马神经元凋亡〔2〕。为了研究其作用机理，本课题组对复方二精灵多糖进行了分离纯化，并对其结构进行了初步研究。1材料与仪器1.1药材与试剂滇黄精，云南产；宁夏枸杞，宁夏产；DEAE-52、SephadexG-200、CMSephadexC-50，Pharmacia进口分装；透析袋，截留分子量为1000；苯酚经过重蒸，其它试剂均为国产分析纯。1.2仪器Agilent6890N气相色谱仪（Agilent）；HP-5石英毛细管柱；-SephadexC-50柱层析进一步分离纯化，蒸馏水洗脱，分别收集含糖主峰并冷冻干燥得二

6、精灵Ⅰ（2JLⅠ）和二精灵Ⅱ（2JLⅡ）。2.2多糖各组分的纯度鉴定和分子量测定取2JLⅠ、2JLⅡ适量，用少量水溶解后，上高效液相色谱进行分析。根据所得图谱判断样品的纯度。各取分子量对照品和2JLⅠ、2JLⅡ适量，用少量水溶解后，上高效液相色谱检测，通过GPC色谱工作站自动计算，得各样品的相对分子量（Mn）。色谱条件：流动相纯水；流速1.0ml/min；柱温25℃。2.3红外吸收光谱分析分别取2JLⅠ、2JLⅡ各2～3mg，采用KBr压片，400～4000cm-1扫描得各样品图谱并分析。2.4多糖的单糖组成分析〔4〕2.4.1样品和混合标准单糖的水解

7、准确称取2JLⅠ2.5mg，2JLⅡ1.5mg，标准单糖各3mg于3个具塞试管中，以4ml3mol/L三氟乙酸（TFA）溶解，封管，置于沸水浴中水解6h，冷却后于40℃减压蒸干，加入3ml甲醇并蒸干，反复4次以除去剩余的TFA，40℃真空干燥过夜。2.4.2样品和混合标准单糖衍生物的制备取出已水解并干燥的样品和混合标准单糖，以2ml吡啶溶解，加入0.8ml六甲基二硅胺烷和0.4ml三甲基氯硅烷，混匀后室温放置15min，于冰水浴中加入2ml蒸馏水，混匀后，静置分层，分别取2JLⅠ1μl，2JLⅡ5μl进样分析。气相色谱条件：载气N2，流速1.5ml/m

8、in，进样口温度230℃，检测器温度230℃，柱温采用程序升温方式，初始温度145℃，持续14