大鼠脊神经选择性结扎镜像痛模型的筛选建立

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1、大鼠脊神经选择性结扎镜像痛模型的筛选建立【摘要】目的：研究行为学观察和热辐射缩足反应潜伏期（PWTL）及机械缩足反应潜伏期（MWT）实验筛选建立脊神经选择性结扎（SNL）镜像痛大鼠模型。方法：选取100只成年雄性SD大鼠，将其随机分为SNL组90只和假手术组（Sham组）10只，于术前1d和术后1、3、7、14、21、28d进行行为学观察和双足PWTL及MWT实验检测。结果：两组术前行为学观察、PWTL及MWT值比较差异均无统计学意义（P>0.05），术后SNL组手术足均出现添足、咬足等行为学现象，且PWTL值和MWT值术后1～28d均明显低于Sham组，差异均有统计学意义（

2、P0.05）.Post-operation，SNLgroup’soperated-footappearedhitfeet，bitefeetbehavioralphenomenon，andthePWTLvaluesandMWTvaluesweresignificantlylowercomparedwithShamgroupat1-28dpost-operation，thedifferenceswerestatisticallysignificant（P0.05），具有可比性。1.2制作方法1.2.1坐骨神经选择性结扎模型组（SNL组）SNL组90只，制作方法如下：以氯胺酮10m

3、g/kg和甲苯噻嗪1007mg/kg腹膜腔注射，大鼠麻醉后取俯卧位，后用聚维酮碘溶液消毒皮肤，于背部脊椎L3～S2节段作正中切口，分离右侧脊柱旁肌肉群，显露脊椎并咬断L4～L6椎骨横突，仔细分离并暴露的L4～L6脊神经，于近脊柱正中处用5-0丝线结扎L5、L6脊神经，并于结扎远端进行神经离断，后分层缝合切口。　　1.2.2假手术组（Sham组）Sham组10只，仅右侧显露脊椎并咬断L4～L6椎骨横突，分离并暴露的L4～L6脊神经但不予结扎，其余方法同SNL组。1.3疼痛行为学及痛阈测定用VonFrey纤毛测定大鼠的机械缩足反射阈值（mechanicalwithdrawalth

4、reshold，MWT）以评价大鼠机械痛敏，用热痛刺激仪测定大鼠热刺激缩足反射潜伏期（pawwithdrawalthermallatency，PWTL）以评价大鼠热痛敏。每只大鼠均进行标号并在手术前1d和术后1、3、7、14、21、28d分别测定MWT、PWTL值，每次测量均先测定MWT，再测定PWTL，在测量前先观察其添足、咬足、曲足等行为且每次测量均在上午8：00～10：00之间进行。1.3.1MWT测定方法采用vonFrey丝测定双后肢机械痛阈，将大鼠置于金属笼中适应环境30min，用不同压力纤维丝刺激足底2、3趾间皮肤，每根重复5次，每次间隔5s，直至找到出现50%（

5、10次）抬足反应的纤维丝，其压力值（出现大于5次以上是缩足反应），即为阈值，左右足轮流测试，每足测量5次，取平均值[3]。71.3.2PWTL测量方法采用鼠爪热辐射刺激测痛仪[3]。先让大鼠处于自由活动状态，调整好刺激强度（r=72），将刺激装置放置在鼠爪下，按操作键，当鼠爪移动时系统自动记录大鼠反应时间，此时间即为大鼠足底PWTL，每足测量5次，时间间隔3～5min，取平均值。1.4SNL镜像痛大鼠的筛选实验结束后，对SNL组大鼠的实验记录进行分析，凡术后双足均出现行为学异常、PWTL值和MWT值降低的大鼠标记为SNL镜像痛组大鼠，其余为SNL非镜像痛组。1.5统计学处理采

6、用SPSS13.0软件对所得数据进行统计分析，计量资料用（x±s）表示，比较采用t检验，以P0.05），术后1～28d，SNL镜像痛组和SNL非镜像痛组手术足PWTL和MWT值均明显低于Sham组，差异均有统计学意义（P0.05），见表1～2。3讨论镜像痛在临床和动物实验中均较为普遍，表现为对侧肢体相应部位出现与患侧肢体相同的持续性疼痛、局限性疼痛、灼烧性痛、感觉异常、出汗等，如临床上复杂的区域疼痛综合征、截肢和中风后遗症等，加重患者负担，给患者带来极大痛苦[2]。7对于镜像痛的动物实验研究较早见于Zhang等[4]在2000年的单节段背根神经节慢性压迫实验中发现了镜像痛现象

7、的报道。后关于镜像痛的报道陆续出现，Arguis等[5]发现在L5、L6脊神经结扎模型中，大鼠同侧和对侧后肢均出现机械刺激和冷刺激的痛觉异常。Schreiber等[6]在小鼠后足注射急性致炎物质角莱胶后，发现对侧后足出现了短暂延迟随后稳定持久的疼痛现象。镜像痛模型的构建方面，周围神经损伤引起镜像痛的报道较多，如关节炎模型、癌症痛模型，但脊神经损伤模型最为多见，常见的脊神经损伤模型有坐骨神经慢性压迫模型（CCI）、脊神经选择性结扎模型（CNL）、脊神经选择性损伤模型（SNI）及脊神经背根神经节慢性压迫模型