大鼠脊神经选择性结扎镜像痛模型的构建策略

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1、大鼠脊神经选择性结扎镜像痛模型的构建策略镜像痛是指当躯体某一组织和部位发生损伤后，导致损伤侧和对侧相应部位均出现疼痛和痛敏现象［1］。临床上一些复杂的区域疼痛综合征及慢性病理性疼痛等均可出现镜像痛［2］。临床治疗效果不佳，动物实验研究较少。目前对镜像痛模型的研究多集中在对坐骨神经损伤后建立神经病理性疼痛模型的基础上筛选镜像痛模型，但在筛选方法、筛选标准、筛选成功率方面鲜见报道。本实验在建立坐骨神经选择性结扎神经病理性疼痛模型基础上进行筛选以建立镜像痛模型，为镜像痛的机制研究提供实验依据，现报告如下。1材料与方法实验动物分组选取100只成年SD大鼠，雄性，体

2、重250〜300g,将其随机分为SNL组90只和假手术组10只，两组大鼠的一般资料比较差异均无统计学意义，具有可比性。制作方法坐骨神经选择性结扎模型组SNL组90只，制作方法如下：以氯胺酮10mg/kg和甲苯卩塞嗪100mg/kg腹膜腔注射，大鼠麻醉后取俯卧位，后用聚维酮碘溶液消毒皮肤，于背部脊椎L3〜S2节段作正中切口，分离右侧脊柱旁肌肉群，显露脊椎并咬断L4〜L6椎骨横突，仔细分离并暴露的L4〜L6脊神经，于近脊柱正中处用5-0丝线结扎L5、L6脊神经，并于结扎远端进行神经离断，后分层缝合切口。假手术组Sham组10只，仅右侧显露脊椎并咬断L4〜L6椎

3、骨横突，分离并暴露的L4〜L6脊神经但不予结扎，其余方法同SNL组。疼痛行为学及痛阈测定用VonFrey纤毛测定大鼠的机械缩足反射阈值以评价大鼠机械痛敏，用热痛刺激仪测定大鼠热刺激缩足反射潜伏期以评价大鼠热痛敏。每只大鼠均进行标号并在手术前1d和术后1、3、7、14、21、28d分别测定MWT.PWTL值，每次测量均先测定MWT,再测定PWTL,在测量前先观察其添足、咬足、曲足等行为且每次测量均在上午8：00〜10：00之间进行。MWT测定方法采用vonFrey丝测定双后肢机械痛阈,将大鼠置于金属笼中适应环境30min,用不同压力纤维丝刺激足底2、3趾间皮

4、肤，每根重复5次，每次间隔5s,直至找到出现50%抬足反应的纤维丝，其压力值，即为阈值，左右足轮流测试，每足测量5次，取平均值［3］。PWTL测量方法采用鼠爪热辐射刺激测痛仪［3］。先让大鼠处于自由活动状态，调整好刺激强度，将刺激装置放置在鼠爪下，按操作键，当鼠爪移动时系统自动记录大鼠反应时间，此时间即为大鼠足底PWTL,每足测量5次，时间间隔3〜5min,取平均值。SNL镜像痛大鼠的筛选实验结束后，对SNL组大鼠的实验记录进行分析，凡术后双足均出现行为学异常、PWTL值和MWT值降低的大鼠标记为SNL镜像痛组大鼠，其余为SNL非镜像痛组。统计学处理釆用S

5、PSS软件对所得数据进行统计分析,计量资料用表示，比较采用t检验，以P〈为差异有统计学意义。2结果行为学观察SNL组与Sham组术前无特异性行为，两组大鼠术后均出现舔舐伤口行为，SNL组大鼠行坐骨神经选择性结扎术后7d内手术侧出现添足、咬足、垂足、脚趾并拢、屈曲等行为；SNL组7d内对侧足也出现上述行为的定义为SNL镜像痛组大鼠，共筛查出14只，其余为SNL非镜像痛大鼠，共76只，对侧足未出现上述行为。各组大鼠PWTL和MWT值的比较各组术前PWTL和MWT值比较差异均无统计学意义，术后1~28d,SNL镜像痛组和SNL非镜像痛组手术足PWTL和MWT值均

6、明显低于Sham组，差异均有统计学意义。SNL镜像痛组对侧足MWT值于术后14、21、28d均明显低于Sham组，且PWTL值于术后21、28d均明显低于Sham组，差异均有统计学意义；而SNL非镜像痛组与Sham组的对侧足术后PWTL和MWT值比较差异均无统计学意义，见表1〜2。3讨论镜像痛在临床和动物实验中均较为普遍，表现为对侧肢体相应部位岀现与患侧肢体相同的持续性疼痛、局限性疼痛、灼烧性痛、感觉异常、出汗等，如临床上复杂的区域疼痛综合征、截肢和中风后遗症等，加重患者负担，给患者带来极大痛苦［2］。对于镜像痛的动物实验研究较早见于Zhang等［4］在2

7、000年的单节段背根神经节慢性压迫实验中发现了镜像痛现象的报道。后关于镜像痛的报道陆续出现，Arguis等⑸发现在L5、L6脊神经结扎模型中，大鼠同侧和对侧后肢均出现机械刺激和冷刺激的痛觉异常。Schreiber等［6］在小鼠后足注射急性致炎物质角莱胶后，发现对侧后足出现了短暂延迟随后稳定持久的疼痛现象。镜像痛模型的构建方面，周围神经损伤引起镜像痛的报道较多，如关节炎模型、癌症痛模型，但脊神经损伤模型最为多见，常见的脊神经损伤模型有坐骨神经慢性压迫模型、脊神经选择性结扎模型、脊神经选择性损伤模型及脊神经背根神经节慢性压迫模型等［7-12］o但在疼痛模型基础

8、上如何筛选镜像痛模型的筛选方法、筛选标准、筛选成功率方面鲜见报道。