慢性乙型肝炎（chb）可分为hbeag阳性chb和hbeag阴性chb，hbeag阳性chb ...

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1、HBV前C区和BCP区突变与慢性乙肝病情的关系翁彭剑高国生丁世雄梁晓岳唐向荣【关键词】乙型肝炎病毒；前C区；核心启动子区；突变；基因芯片Theinfluenceofthepre-coreandBCPmutationsontheseverityofchronichepatitisBWENGPeng-jian,GAOGuo-sheng,DINGShi-xiong,LIANGXiao-yue,TANGXiang-rong.【Keywords】HBV；PreC；BCP；mutation；microamrray【Firstauthor’saddress】NingboHospitalofLiver

2、Diseases,Ningbo,Zhejiang,315010,China乙型肝炎病毒（HBV）是一个双链DNA病毒。HBV感染能导致急、慢性的肝病，其中全球慢性乙型肝炎（CHB）患者超过3.6亿。每年由于HBV慢性感染引起的肝硬化，肝细胞癌死亡患者超过47万人[1]。而由于HBV病毒的复制过程缺乏校对机制，在慢性感染的过程中发生基因突变的几率很高，相关研究最多的HBV突变株主要有：一是发生在翻译水平的前C突变（G1896A）；二是发生在核心启动子区（BCP区），即A1762T和G1764A的联合突变；三是发生在HBVDNA聚合酶（反转录酶）区的变异包括P区528、552位点的突变。研

3、究表明，HBV前C区1896位突变以及BCP区突变普遍存在于慢性乙型肝炎（CHB）患者中，且随临床病情加重突变感染率逐渐增加，诱导肝脏炎症活动和肝损害，从而使肝纤维化程度呈加重趋势。现采用基因芯片技术对HBV病毒前C区和BCP区突变与慢性乙型肝炎病情的关系进行了较为系统的临床研究。材料与方法1．1样本来源：收集2003年1月—2005年4月宁波市肝病医院收治慢性乙肝患者HBVDNA阳性血清标本，－30℃保存。（滴度103－109拷贝/ml，HBVDNA荧光定量试剂盒为达安公司产品，使用RocheLightCycle荧光定量PCR仪）。基金项目：中国科学院知识创新工程（KSCX－06）作

4、者单位：315016浙江省宁波市肝病医院检验科（翁彭剑、高国生、丁世雄、梁晓岳）；中国科学院上海微系统与信息技术研究所（唐向荣）翁彭剑，E-mail：wpj50@sina.com13其中男性患者238例，女性患者110例；年龄16－65岁，平均年龄（41±6）岁；大三阳患者212例，小三阳患者136例（详见表一）。348乙肝患者中，肝癌9例，肝硬化74例，慢性乙肝标本中有54例慢性重度乙型肝炎，140例中度乙型肝炎，53例轻度乙型肝炎，无症状携带者18例。病情诊断标准依据2000年病毒性肝炎防治方案。表一患者信息例数性别（男/女）年龄均值（范围）HBVDNA均值(范围)HbeAg＋/H

5、beAg－无症状HBV携带者1811/729.3（±11.3）4.6×104（1.2×103－5.6×106）5/13慢性乙型肝炎轻度5341/1233.1（±8.1）1.3×105（1.2×103－2.5×106）35/18*中度14093/4739.2（±11.2）2.5×107（3.6×104－9.6×109）109/31*重度5439/1546.4（±13.6）1.7×107（2.6×103－1.6×109）24/30*乙肝肝硬化7447/2749.7（±16.2）2.3×105（5.6×103－4.6×106）33/41*肝癌97/254.3（±15.4）5.6×104（1.

6、2×103－3.8×106）5/4**SPSS软件分析卡方分析，与ASC患者HbeAg＋比例差异显著，P<0.051．2检测方法：（1）血清HBVDNA的抽提和扩增蛋白酶K烈解，酚、氯仿抽提，酒精沉淀。引物设计参考HBV全基因序列（AB014366），Nested－PCR扩增包括前C1896位及1762、1764位的前C片段，产物长度分别为325bp、239bp，正向外引物为C1（5’-ACGACCGACCTTGAGGCATACTTC-3’，nt1691-1714），反向为C2（5’-CAGAGCAGAGGCGGTGTCG-3’，nt1998-2016）；正向内引物为C3（5’-GAG

7、TTGGGGGAGGAGATTAGGTTA-3’，nt1741-1765），反向为C4（5’-Dig-AGGAAAGAAGTCAGAAGGCAAAAA-3’，nt1957-1980），反向引物C45’端带有地高辛标记，用于芯片杂交显色。引物合成及修饰委托TaKaRa公司完成，PCR系统含10×缓冲液1.5µl,Taq酶1U，25mmol/LMgCl20.8µl、25mmol/LdNTP1µl，上下游引物各0.5µl，引物终浓度为0.5pmol/