folinwu法测定血液葡萄糖含量

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1、实验23Folin—Wu法测定血液葡萄糖含量一、目的学会用Folin—Wu法测定血液中葡萄糖含量。二、原理葡萄糖的半缩醛羟基具有还原性，在加热条件下可使碱性铜试剂中的Cu2+还原为黄色的氧化亚铜沉淀，而其本身被氧化为羧基。氧化亚铜可使磷钼酸还原成蓝色的钼蓝，蓝色的深度与葡萄糖的浓度成正比，故可用比色法测定钼蓝的光吸收值来测定葡萄糖的浓度。3Cu2O+2MoO3→6CuO+Mo2O3(氧化亚铜)（钼蓝）血糖即指血液中存在的葡萄糖。由于血液中成分复杂，尤其有许多种蛋白质存在，它们对血糖的测定会产生干扰。因此，目前常用钨酸法处理抗凝血来制备无蛋白滤液，然后用来

2、测定无蛋白滤液中的葡萄糖含量。Na2WO4+H2SO4→H2WO4+Na2SO4(钨酸钠)（钨酸）在测定过程中，由于空气中的氧对Cu2O会产生再氧化作用从而影响测定结果，因此实验中要采用特制的福林—吴宪血糖管——有一细颈，可以尽量减少与空气的接触。（图23-1）12图23-1血糖管和奥氏吸管1．（Folin-吴宪式）血糖管2.奥氏吸管三、材料、试剂和器具（一）材料饥饿16小时的鸡或兔（二）试剂1、草酸钾（A.R）2、0.25%苯甲酸溶液3、10%钨酸钠溶液称取10g钨酸钠，用双蒸水溶解后定容至100ml。4、1/3mol/L硫酸溶液5、标准葡萄糖溶液（0

3、.1mg/ml）称取1.000g无水葡萄糖，用苯甲酸水溶液溶解后定容至1000ml，其浓度为1mg/ml。可长期保存使用。使用时用蒸馏水稀释，配成0.1mg/ml的葡萄糖溶液。6、碱性铜试剂分别称取40g无水碳酸钠、7.5g酒石酸、4.5g硫酸铜结晶，用蒸馏水溶解后混合，定容至1000ml。本试剂于室温下可长期保存使用，若有沉淀产生，应过滤后再使用。7、磷钼酸试剂称取70g钼酸、10g钨酸钠，量取10%氢氧化钠400ml及蒸馏水400ml，于烧杯中混合加热20~40min（以除去可能夹杂于钼酸中的氨），冷却后加入85%磷酸250ml，混匀后定溶至1000

4、ml..（三）器具1、剪刀2、烧杯3、试管与试管架4、玻璃棒5、奥氏吸量管（见图23—1）6、血糖管（见图23—1）7、小漏斗8、可见光分光光度计9、水浴锅10、移液管11、电炉12、天平13、容量瓶四、操作步骤（一）制备无蛋白滤液1．杀鸡取血后立即按2g草酸钾/L血液的比例加入草酸钾，以制备抗凝血。2．于一支试管中加入7.5ml蒸馏水。3．用奥氏吸管量取0.5ml抗凝血。小心擦去管外血液后，于试管底部缓缓放出血液。吸取试管内蒸馏水吹洗吸管数次后，充分摇匀，使血液完全溶血。注意不要使血液粘附于奥氏吸量管壁。4．加入1/3mol/L硫酸1ml边加边摇，摇匀

5、后放置5min。5．加入10%钨酸钠溶液1ml，边加边摇，摇匀后放置5min.6．过滤、收集滤液备用。若滤液不清，应重新过滤直至滤液澄清为止。至此，所制得的无蛋白滤液为20倍稀释的无蛋白血滤液，即每毫升血液相当于含血0.05ml..(二)血糖的测定1．取血糖管3支，按下表进行编号后操作。血糖管编号试剂（ml）空白管标准管测定管蒸馏水2.0无蛋白血滤液2.0标准葡萄糖液2.0碱性铜溶液2.02.02.0混匀，沸水浴中煮8min，勿摇动取出，流水冷却磷钼酸试剂2.02.02.0蒸馏水19.019.019.02.充分混匀。3．用分光光度比色测定吸光值A620n

6、m。（三）血糖浓度计算结果如下：每100ml血液所含葡萄糖的毫克数=×标准葡萄糖的毫克数×式中0.1表示2ml血滤液相当于0.1ml血液。五、注意事项1．过滤时应于漏斗上盖一表面皿，防止水分蒸发。2．所用试管、漏斗均需干燥。六、实验报告以你的实验结果与其它测定血糖方法比较，有什么优缺点？七、思考题1．钨酸的作用是什么？2．血糖管和奥氏吸管的结构特点对本实验有何作用？3、为什么实验中以无蛋白滤液，而不以全血、血浆或血清来测定血糖含量？