乳腺癌患者血浆rassf1a基因启动子甲基化的意义

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1、乳腺癌患者血浆RASSF1A基因启动子甲基化的意义【摘要】　　目的：探讨乳腺癌患者血浆、肿瘤组织中RASSF1A基因启动子甲基化与临床病理等因素的相关性.方法：采用甲基化特异性PCR方法，分别检测68例乳腺癌患者血浆、肿瘤组织及癌旁腺体组织，以及12例良性乳腺疾病患者的血浆和乳腺组织中RASSF1A基因启动子甲基化状况.结果：乳腺癌组织RASSF1A基因启动子甲基化频率47.1%（32/68），患者血浆中同样DNA变异检出率33.8%（23/68）.血浆中DNA甲基化状况与乳腺癌组织的甲基化状况显著相关（r=0.906,P=0.001）.检测血浆中RASSF1A基因启动子甲

2、基化的敏感性71.8%，特异性97.2%，肿瘤组织及血浆中游离DNA甲基化异常与临床分期，病理类型，肿瘤大小，ER，PR和cerbB2状况无相关性（P>0.05）.乳腺癌组织中未检测到RASSF1A基因启动子甲基化的血浆中、乳腺良性疾病患者血浆中均未检测到该基因甲基化变异.结论：乳腺癌患者血浆中RASSF1A基因启动子甲基化与肿瘤组织中的变异频率相关.【关键词】乳腺肿瘤；RASSF1A基因；甲基化　　【Abstract】AIM:ToinvestigatetherelationshipbetotermethylationoftumorsuppressorgeneRAS

3、SF1Ainplasmaandclinicopathologicalfeaturesofbreastcancer.METHODS:MethylationspecificPCReasurethepromotermethylationstatusinplasma，pairedtumortissueandparacancerousnormaltissueof68patientsaandmammaryglandof12patientsoterhypermethylationortissueand33.8%(23/68)inpairedplasma.RASSF1Agenehyperm

4、ethylationinplasmaortissue(r=0.906,P=0.001).ThesensitivityofRASSF1AgenehypermethylationdetectioninplasmaethylationofRASSF1Ageneintumortissueandplasmahadnocorrelationtopatientsage,tumorstage,tumorsize,histologicaltype,ER,PR,andreceptorstatus(P>0.05).NoaberrantmethylationofRASSF1Ageneasa

5、mplesfromthepatientstheonesethylationintumortissue.CONCLUSION:TheaberrantRASSF1Agenepromotermethylationinplasmaofbreastcancerpatientsissignificantlycorrelatedtothatinbreastcancertissue.　　【keys;RASSF1A;methylation　　0引言　　乳腺癌发生发展伴随着许多基因的改变，其中包括了抑癌基因的失活，如基因突变、染色质丢失和启动子异常甲基化等.Ras相关区域家族1A（rasass

6、ociationdomainfamily1A,RASSF1A）是2000年发现的一种候选抑癌基因［1］，其失活在乳腺癌的发生发展中具有重要意义［2-4］.我们采用甲基化特异性PCR方法检测乳腺癌患者血浆、肿瘤组织和癌旁腺体组织中RASSF1A基因启动子甲基化的状况，并研究其临床意义.　　1　材料和方法　　1.1　材料　　经病理学检查确诊后进行手术治疗的乳腺癌患者68例，均未行术前化疗.包括乳腺癌改良根治术58例，乳腺单纯切除6例，乳腺癌根治术4例.对年龄、肿瘤大小、病理类型、淋巴结转移、临床分期、雌性激素受体、孕激素受体和cerbB2情况进行列表（表1）.同期采集10例乳

7、腺纤维腺瘤和2例乳腺增生症患者的血浆作为正常对照.　　1.2　方法　　术前采用BD真空采血管采集乳腺癌患者肘静脉血5mL，EDTANa2抗凝，于4℃条件下2000g离心10min，小心转移上层血浆至1.5mL离心管中，再于4℃条件下12000g离心10min，将上清以200μL/管分装后置-80℃冰箱中保存.术中取乳腺癌组织，距离肿瘤边缘5cm以上取癌旁腺体组织，分别标记于-80℃保存.血浆DNA抽提按照QIAampBloodMiniKit操作说明书进行.肿瘤及癌旁组织取50mg剪碎后研磨，加入组织裂解液500μ