血管内照射对抑制兔血管损伤术后平滑肌细胞增殖疗效观察

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1、血管内照射对抑制兔血管损伤术后平滑肌细胞增殖疗效观察作者:曹莉，曾知恒，刘唐威，黄凯，覃伟武【摘要】目的观察188铼血管内照射对抑制新西兰白兔血管损伤术后平滑肌细胞增殖疗效。方法40只新西兰白兔行腹主动脉球囊内皮拉伤后分别予188Re血管内照射（照射组），不予血管内照射（对照组），分析术后3、6周病理组织学标本平滑肌细胞增殖和凋亡情况。结果照射组3周平滑肌细胞比对照组增殖细胞明显下降，凋亡细胞明显增多（P＜0.05），6周两组平滑肌细胞增殖、凋亡无显著性意义(P＞0.05)。结论血管内照射能有效抑制新西兰白兔血管损伤术后平滑肌细胞增殖，促进平滑肌

2、细胞细胞凋亡。【关键词】新西兰白兔；再狭窄；188铼；血管内照射Effectsofintravascularirradiationoninhibitionproliferationofrabbitvesselsmoothmusclecellsafterballoonangioplasty【Abstract】ObjectiveToobservetheeffectof188Reintravascularirradiationoninhibitingproliferationofrabbitvesselsmoothmusclecells(VSMCs)a

3、fterballoonangioplasty.MethodsFortyNeballooncatheteroverstretchedonabdominalaorticartery.Inirradiationgroup，188Re-radioactiveliquidfilledballoonirradiationedintargetsegment.ProliferationandapoptosisofVSMCsintargetsegmentg/kg和氯丙嗪10～20mg/kg肌肉注射麻醉动物，分离右股动脉并给予肝素150IU/kg，用3.0mm×20

4、mm球囊经股动脉逆行插入腹主动脉，以8个大气压（atm）扩张2min，中间间隔30s，撤出球囊。将另一球囊再次逆行插入扩张部位，注入188Re溶液，以2atm充盈球囊。本实验参考Hoher［4］等应用剂量，选择组织0.5mm处吸收剂量为15Gy，根据临床用剂量计算经验公式计算达到靶剂量时所用的时间为353～653ｓ。对照组则行腹主动脉拉伤后不予188Re血管内照射。结扎右股动脉，青霉素干粉局部敷撒，缝合皮肤，普通饲料喂养。(2)分别于术后第3、6周处死动物，每次处死各10只。取腹主动脉拉伤血管常规脱水固定，石蜡包埋，制作切片，分别进行PA免疫组化

5、检测、TUNEL检测。(3)两组动物分别于术前、术后3、6周，空腹12h，第2天早晨经耳缘静脉采血，行血常规检查，测定红细胞（RBC）、血红蛋白（HGB）、白细胞（Cs增殖细胞PA染色见细胞核内呈细颗粒状棕黄色沉淀。每个血管取3张切片，行PA染色，每张切片随机选10个高倍视野，分别计数每个高倍视野中细胞总数和PA阳性细胞数，计算PA阳性细胞占总计数细胞的百分比（PA阳性细胞数/计数细胞总数×100%），取平均值。(2)VSMCs凋亡细胞TUNEL染色见细胞核呈棕褐色。每个血管取3张切片，行TUNEL染色，每张切片随机选10个高倍视野，分别计数每个

6、高倍视野中细胞总数和TUNEL阳性细胞数，计算VSMCs凋亡细胞百分比（TUNEL阳性细胞数/计数细胞总数×100%），取其平均值。1.5统计学分析结果以均数±标准差（x±s）表示，应用SAS8.0软件进行配对ｔ检验或组间ｔ检验，P＜0.05表示差异有显著性。2结果2.1PA免疫组化分析PA是一种仅在增殖细胞中合成或表达的核内多肽，其表达和合成与细胞周期有关，主要表达于增殖细胞的S期、G1期和G2初期，是判断细丙增殖度的一种指标。本实验PA染色显示，与对照组相比，第3周照射组PA阳性细胞百分比明显降低，差异有显著性（P=0.046），第6周则差异

7、无显著性（P=0.076）（见表1）。2.2TUNEL检测分析细胞凋亡时，由于内源性核酸内切酶的激活，核DNA被切割成许多双链DNA片段以及高分子量DOA单链断裂点，暴露出大量3-羟基末端，用末端脱氧核苷酸转移酶标记缺口末端，则可原位特异地显示出凋亡细胞。本实验TUNEL检测显示，与对照组相比，照射组3周VSMCs凋亡细胞百分比明显高于对照组，差异有显著性（P=0.018），6周VSMCs凋亡细胞百分比差异无显著性（P=0.251）（见表1）。2.3血常规分析照射前、照射后3、6周血常规检查结果显示，各时段外周全血中RBC、HGB、>P>0

8、.05)。表1两组各时点PA与凋亡细胞百分比(％，x±s)3讨论VSMCs参与球囊损伤后新生内膜形成，可迁徙、增殖和形成基质，在PTCA