血管内照射对抑制兔血管损伤术后平滑肌细胞增殖疗效观察论文

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1、血管内照射对抑制兔血管损伤术后平滑肌细胞增殖疗效观察论文.freeloothmusclecellsafterballoonangioplasty【Abstract】ObjectiveToobservetheeffectof188Reintravascularirradiationoninhibitingproliferationofrabbitvesselsmoothmusclecells(VSMCs)afterballoonangioplasty.MethodsFortyNeballooncatheteroverstretchedonabdominalaorticartery.In

2、irradiationgroup，188Re-radioactiveliquidfilledballoonirradiationedintargetsegment.ProliferationandapoptosisofVSMCsintargetsegmentg/kg和氯丙嗪10～20mg/kg肌肉注射麻醉动物，分离右股动脉并给予肝素150IU/kg，用3.0mm×20mm球囊经股动脉逆行插入腹主动脉，以8个大气压（atm）扩张2min，中间间隔30s，撤出球囊。将另一球囊再次逆行插入扩张部位，注入188Re溶液，以2atm充盈球囊。本实验参考Hoher［4］等应用剂量，选择组织0.5

3、mm处吸收剂量为15Gy，根据临床用剂量计算经验公式计算达到靶剂量时所用的时间为353～653ｓ。对照组则行腹主动脉拉伤后不予188Re血管内照射。结扎右股动脉，青霉素干粉局部敷撒，缝合皮肤，普通饲料喂养。(2)分别于术后第3、6周处死动物，每次处死各10只。取腹主动脉拉伤血管常规脱水固定，石蜡包埋，制作切片，分别进行PA免疫组化检测、TUNEL检测。(3)两组动物分别于术前、术后3、6周，空腹12h，第2天早晨经耳缘静脉采血，行血常规检查，测定红细胞（RBC）、血红蛋白（HGB）、白细胞（Cs增殖细胞PA染色见细胞核内呈细颗粒状棕黄色沉淀。每个血管取3张切片，行PA染色，每张切片随

4、机选10个高倍视野，分别计数每个高倍视野中细胞总数和PA阳性细胞数，计算PA阳性细胞占总计数细胞的百分比（PA阳性细胞数/计数细胞总数×100%），取平均值。(2)VSMCs凋亡细胞TUNEL染色见细胞核呈棕褐色。每个血管取3张切片，行TUNEL染色，每张切片随机选10个高倍视野，分别计数每个高倍视野中细胞总数和TUNEL阳性细胞数，计算VSMCs凋亡细胞百分比（TUNEL阳性细胞数/计数细胞总数×100%），取其平均值。1.5统计学分析结果以均数±标准差（x±s）表示，应用SAS8.0软件进行配对ｔ检验或组间ｔ检验，P＜0.05表示差异有显著性。2结果2.1PA免疫组化分析PA是一

5、种仅在增殖细胞中合成或表达的核内多肽，其表达和合成与细胞周期有关，主要表达于增殖细胞的S期、G1期和G2初期，是判断细丙增殖度的一种指标。本实验PA染色显示，与对照组相比，第3周照射组PA阳性细胞百分比明显降低，差异有显著性（P=0.046），第6周则差异无显著性（P=0.076）（见表1）。2.2TUNEL检测分析细胞凋亡时，由于内源性核酸内切酶的激活，核DNA被切割成许多双链DNA片段以及高分子量DOA单链断裂点，暴露出大量3-羟基末端，用末端脱氧核苷酸转移酶标记缺口末端，则可原位特异地显示出凋亡细胞。本实验TUNEL检测显示，与对照组相比，照射组3周VSMCs凋亡细胞百分比明显

6、高于对照组，差异有显著性（P=0.018），6周VSMCs凋亡细胞百分比差异无显著性（P=0.251）（见表1）。2.3血常规分析照射前、照射后3、6周血常规检查结果显示，各时段外周全血中RBC、HGB、Cs参与球囊损伤后新生内膜形成，可迁徙、增殖和形成基质，在PTCA术后RS中起着关键作用。早在20世纪50年代，核医学工作者就使用放射性核素防治瘢痕形成，取得了良好效果。有研究表明，血管内照射能抑制VSMCs增殖，使细胞停滞在G0/G1期，还能明显抑制细胞迁移及促使细胞凋亡［5］。照射治疗预防RS机制是放射线对生物大分子的电离辐射作用［6］：细胞暴露于射线时，DAN突变，染色体畸变，

7、核酸及蛋白质合成受损，细胞增殖分裂能力下降或消失，最终抑制细胞增殖甚至导致细胞死亡。这种作用随细胞增殖分裂活动能力不同而不同，即静止细胞对电离辐射敏感性较弱，而增殖旺盛细胞敏感性显著增强。目前在动物实验和临床应用的血管内照射核素种类很多，主要有γ射线源和β射线源。γ射线穿透力强，易对非靶组织产生损害，在操作过程中对医生和患者的防护比较困难，操作不当会导致辐射损伤［7］。188Re发射高能β射线，组织中射程短，能有效抑制内膜增生而对受照射机体影响小，减少操作