新型亚甲基四氢叶酸还原酶单核苷酸多态性研究方法检测恶性血液病易感性

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1、新型亚甲基四氢叶酸还原酶单核苷酸多态性研究方法检测恶性血液病易感性作者：陈宝安　姜妮　祭美菊　侯鹏陆祖宏　高冲　丁家华　,孙耘玉　王骏　程坚　赵刚【摘要】　　本研究探讨一种新型亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）单核苷酸多态性(SNP)检测方法，并用其检测恶性血液病遗传易感性。根据cDNA芯片原理制作一种目的基因芯片，利用双色荧光探针杂交进行SNP位点检测，测序法对该芯片检测结果的准确性进行验证,并以此对来自中国江苏地区的157例健康对照和127例恶性血液病患者(30例多发性骨髓瘤，28例非霍奇金淋巴瘤，22例急性淋巴细胞白血病，40例急性髓系白血病，7例慢性髓系白

2、血病)的MTHFR基因C677T多态位点进行检测。结果表明，为野生型、杂合型和突变型的叠加荧光分别显示为绿色、黄色和红色。测序结果与芯片结果吻合。677C和677T在病例和对照组的基因频率分别为58.7%、66.9%、41.3%和33.1%，差异有显著性（χ2=4.077,P=0.043）。677TT基因型发生MM相对风险明显增加（OR=4.21；95%CI=1.50-11.83；P=0.006）。结论：本芯片检测方法准确、高通量且价格低廉，适用于大规模样本SNP调查；C677T多态改变影响恶性血液病的发病风险。677TT基因型是MM的易感因素。【关键词】单核苷酸

3、多态性；基因芯片；双色荧光杂交；亚甲基四氢叶酸还原酶；恶性血液病　　ANeorphismsGenotypingUsedtoStudySusceptibilityofHematologicalMalignancy　　AbstractTheaimofthisstudyethodfor5,10-Methyleetrahydrofolatereductase(MTHFR)singlenucleotidepolymorphisms(SNP)genotyping,andtoinvestigatethehereditarysusceptibilityofhematologica

4、lmalignancy.PreparedanaimedgenemicroarraybasedoncDNAmicroarraytheory,dual-colorfluorescenecehybri-dizationedtoconfirmtheresults.TheMTHFRC677TSNPlociof157controlsand127patientsatologicalmalignancies(30multiplemyeloma,28non-Hodgkin′slymphoma,22acutelymphoblasticleukemia,40acutemyeloidle

5、ukemia,7chronicmyeloidleukemia)fromJiangsuprovinceozygousozygousmutanttypeyieldedgreen,yelloicroarray-basedmethodisaccurate,high-throughputandinexpensive,suitableforSNPgenotypinginalargenumbeerofindividuals.C677Tpolymorphismsinfluencetheriskofhematologicalmalignancies.677TTgenotypeiss

6、usceptivetoMM.　　Keyorphism;genemicroarray;dual-colorfluorescenecehybridization;5,10-methyleetrahydrofolatereductase;hematologicalmalignancy　　染色体DNA序列的某个位点上存在的单个碱基变化如果在人群中的发生频率超过1%，即为单核苷酸多态性（SNP）。表达基因平均每1000bp即出现一个SNP位点，是人类基因组序列变异的主要形式。在不同的人群中，SNP的频率分布有差异，这些差异可以代表某一种族或人群间的遗传差异。研究SNP有助于

7、解释个体的表型差异、不同群体和个体对疾病，特别是对复杂疾病的易感性，以及对各种药物的耐受性和对环境因子的反应性。因此，有必要建立一种准确、费用低、适合大样本的SNP检测方法。近年来研究表明，叶酸缺乏和（或）叶酸代谢异常可导致多种肿瘤的发生。亚甲基四氢叶酸还原酶（5，10-methyleetrahydrofolatereductase，MTHFR）是叶酸代谢的关键酶，其基因C677T位点多态改变引起酶活性下降，已被证实它与多种肿瘤的易感性有关。为此我们建立一种芯片检测方法，并对恶性血液病患者的C677T位点进行初步分析。　　材料和方法　　研究对象　　127例病例样本

8、取自东南大