家族性与散发性帕金森病parkin基因4号外显子突变的差异性研究

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1、家族性与散发性帕金森病Parkin基因4号外显子突变的差异性研究作者：李立宏　高国栋　王学廉　赵振伟　贾栋【关键词】帕金森病　　DifferencestudyonsporadicParkinsonsdiseaseandfamilialParkinsonsdiseaseinexon4ofParkingene　　【Abstract】AIM:Tostudythedifferenceofexon4mutationofParkingenebetilialParkinsonsdisease(FPD)byPCR,genesequencedetectionandTDI-FPtechniq

2、ue,toexploretheimportantroleofParkingeneinthepathogenesisofParkinsonsdisease,andtoestablishaneethodforgenotypingofmutationpatterns.METHODS:Theexperimentgroupincluded36FPDpatientsand114SPDpatients,andthecontrolgroupconsistsof150healthysubjects.ThetargetDNAfragmentofParkingeneexon4plifiedby

3、polymerasechainreactionandthelostfragmentsutationtypeandainetheSNPmutationgenotype.RESULTS:Ofthe36casesentlostutationentlostutationentlostutationutationmaybeoneofthekeyfactorsinthepathogenesisofParkinsonsdisease.SporadicParkinson'sdiseaseandfamilialParkinsonsdiseasehavedifferentmutationpa

4、tterns,ayberelatedutation;exons　　【摘要】目的：通过聚合酶链式反应（PCR）、基因测序技术及TDIFP技术，检测散发性与家族性帕金森病Parkin基因4号外显子突变的差异性，探讨Parkin基因突变在PD发病机制中的作用，同时建立一种新的突变检测方法.方法:以36例家族性及114例散发性PD患者为实验对象，150名正常健康人为阴性对照，通过PCR扩增含Parkin基因4号外显子的DNA片段，电泳分析初次筛选片段缺失者.基因测序技术对无缺失片段进行克隆、测序，筛选出突变型及野生型.最后应用TDIFP技术检测R110或TAMRA标记ddNTP的

5、FP值，鉴定Parkin基因4号外显子的基因点突变型.结果:在36例家族性PD患者中共发现10例4号外显子缺失突变，占27％，点突变有4例，占11%；114例散发性PD患者中仅有2例4号外显子缺失突变，占1%，而点突变则有48例，占42%.150例阴性对照组中无缺失突变，点突变10例，占6%.结论:Parkin基因突变可能是PD发病的重要因素之一，而散发性与家族性帕金森病具有不同的突变类型，可能与其具有不同的发病机制相关联.　　【关键词】帕金森病；基因，突变；外显子　　0引言　　Parkin基因是目前研究发现与帕金森病（Parkinsonsdisease，PD）发病密切相

6、关的遗传易感基因之一，该基因包括12个外显子，有多处突变，其中以4号外显子（exon4）为主，该外显子处于Parkin基因的突变热点区域.对该外显子的突变规律的研究对于揭示PD的遗传学特性具有重大指导意义.　　1资料和方法　　11临床资料实验组PD患者150（男98，女52），平均年龄（45±20）岁，平均发病年龄（40±12）岁.包括36例家族性及114例散发性PD患者均为1999-02/2003-06我科住院接受苍白球或丘脑毁损手术的患者，符合第一届全国锥体外系会议制订的PD诊断标准.全部病例均无血缘关系.具有家族遗传病史的患者中母系遗传16例，源自父系14例，同时有

7、母系和父系家族史者2例，无法判明是母系还是父系4例.全部实验组中早发型PD40例.对照组150例（其中男98名，女52名，年龄20～67岁，平均45±15岁）系门诊健康查体者，排除锥体外系及其他神经系统变性疾病，其性别及年龄分布两组间无显著性差异（P>005）.　　12方法　　121提取基因组DNA抽取患者及对照组肘静脉血2mL，加05mL的20mL/LEDTA抗凝，应用ReadyPCRTM(华美公司生产)全血基因组DNA纯化系统提取全血基因组DNA.　　122目标DNA片段的提取应用PCR扩增技术对Parkin基因4号