家族性及早发性乳癌病人brca1基因外显子2和20突变研究

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1、家族性及早发性乳癌病人BRCA1基因外显子2和20突变研究【摘要】目的研究青岛地区家族性及早发性乳癌病人乳癌易感基因-1（BRCA-1）外显子2、20的突变情况，探讨其与乳癌发病的关系。方法选取青岛地区家族性乳癌病人（家系中至少一个一级亲属有乳癌患病史）30例、早发性乳癌（发病年龄＜35岁）25例为实验组，以20例乳腺良性肿瘤病人为对照组。应用PCR技术和DNA直接测序技术检测所有标本BRCA1基因外显子2、20的突变情况。结果实验组与对照组在外显子2和20的序列中均未发现有突变。结论BRCA1基因外显子2和20上的序列突变对青岛地区家族性及早发性乳癌发生的影响不大，有待

2、于寻找BRCA1基因的其他突变热点。【关键词】乳腺肿瘤；BRCA1基因；基因突变;青岛　　［ABSTRACT］Objective［ToinvestigatethemutationsitesofBRCA1geneexon2andexon20infamilialandearly-onsetbreastcancerinQingdaoandstudytheirassociationentofthecondition.［Methods［ThirtypatientsilialbreastcancerinQingdaoarea,atleastoneofthefirst-degreere

3、lativehadahistoryofbreastcancer.Thoseentalgroup,and20orsascontrols.Exons（2,20）ofBRCA1geneerasechainreaction（PCR）andDNAsequencing.［Results［Nomutationsutationsdonotmuchcontributefamilialandearly-onsetbreastcancerinthisarea.ThehotspotofothermutationsofBRCA1geneistobelookingfor.［KEYutation;Qi

4、ngdao乳癌是女性常见的恶性肿瘤之一，可分为散发性和遗传性两类，其中遗传性乳癌约占乳癌发病率的5%～10%。乳癌易感基因-1（BRCA-1）是近年来发现的一种重要的肿瘤抑制基因。近年来研究表明，BRCA1基因结构和功能的异常与45%的家族性乳癌、卵巢癌的发生有关［1］，BRCA1在人类乳癌形成和细胞分化中起重要作用［2］。其基因突变可以常染色体显性遗传方式传递给子代。对BRCA1基因进行检测，寻找其致病突变位点，可帮助筛选出高危人群，有助于风险评估和早期诊断；同时也可为未来的高危人群基因筛查和基因诊断提供基本突变谱资料。BRCA1基因在世界各地乳癌病人中的突变有差异。本

5、研究应用PCR及DNA直接测序方法，分析了30例家族性乳癌及25例早发性乳癌病人BRCA1基因第2、20外显子序列,探讨家族性及早发性乳癌BRCA1基因的突变情况。现报告如下。　　1对象与方法　　1.1对象收集青岛大学医学院附属医院病理科2005～2007年的经病理确诊的乳癌石蜡包埋标本55例，其中家族性乳癌（家系中至少一个一级亲属有乳癌患病史）病人30例，年龄小于35岁乳癌病人25例。同时，取乳腺良性肿瘤病人20例作为对照组，均抽取2mL静脉血，EDTA抗凝，置-20℃冰箱备用。　　1.2方法　　1.2.1DNA的提取　　将乳癌石蜡标本切取层厚为5μm的切片5～6层并置

6、于1.5mLEP管中，应用碧云天生物技术研究所出品的基因组DNA小量提取试剂盒（D0063）从石蜡标本中提取基因组DNA。对照组取血后当天从全血中提取淋巴细胞,将细胞裂解,按常规酚-氯仿法提取DNA,溶于TE液中,-20℃保存备用。DNA的纯度及含量经紫外线分光光度仪（BeckmanDU640）测定。　　1.2.2引物设计　　根据文献［3,4］，在BRCA1存在突变热点的区域选择设计两对引物Exon2和Exon20（均由大连宝生物工程公司合成）。其中第一对引物用于特异性扩增BRCA1基因序列（GenBankL78833）第4557～4814位上的258个碱基，引物序列如下

7、：上游引物5′-GAAGTTGTCATTTTAT-AAACCTTT-3′，下游引物5′-TGTCTTTTCTTCCCTAGTATGT-3′。第二对引物用于特异性扩增BRCA1基因序列第71518～71918位上的401个碱基，引物序列如下：上游引物5′-ATATGACGTG-TCTGCTCCAC-3′，下游引物5′-GGGAATCCAAA-TTACACAGC-3′。　　1.2.3PCR扩增　　PCR反应体系及条件：总反应体系50μL，内含DNA模板1μg（根据DNA模板浓度添加），2×PCRTaqMix25μL，上下游引物（浓