BRCA1基因在原发性卵巢癌组织中突变的研究

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1、BRCA1基因在原发性卵巢癌组织中突变的研究癌症1999年第5期第18卷基础研究作者：邓文国　曾瑞萍　蒋玮莹　杜传书单位：中山医科大学医学遗传学教研室（广州，510089）关键词：原发性卵巢肿瘤；BRCA1基因；突变；PCR-SSCP；序列分析　　【摘　要】　目的:探讨BRCA1基因突变在原发性卵巢癌发生中的作用。方法:应用聚合酶链反应-单链构像多态（PCR-SSCP）银染技术及PCR产物直接序列测定的方法检测了56例原发性卵巢癌BRCA1基因第2、5、11、21外显子区域上的突变情况。结果:11例存在PCR-SSCP电泳条带异常，经测序确证了BRCA1基因突

2、变的性质。BRCA1基因突变率在初诊年龄和临床分期上无显著差异。结论:BRCA1基因突变与原发性卵巢癌的发生紧密相关。　　中图分类号:R737.9；R730.231　　文献标识码：A　　文章编号：1000-467X（1999）05-0514-04MutationanalysisofBreastcancergene1(BRCA1)inprimaryovariancancersDENGWen-guo，ZENGRui-ping，JIANGWei-ying，etal.DepartmentofMedicalGenetics,SunYat-senUniversityofM

3、edicalSciences,Guangzhou510089,P.R.China　　【Abstract】Objective:Toanalyzetheroleandtypesofbreastcancergene1(BRCA1)mutationinprimaryovariancarcinogenesis.Methods:ThemutationofBRCA1includingexon2、5、11and21weredetected.PCR-singlestrandconformationpolymorphismanalysis(SSCP)andsequencingwe

4、reperformedon56casesofhumanprimaryovariancancer.Result:11caseswerepresentedalteredsinglestrandband-shiftsbyPCR-SSCP.Casesshowingabnormalband-shiftsinSSCPweresubsequentlyconfirmedtobesingle-basechangebysequencing.TherelationshipbetweenBRCA1mutationsandagesatdiagnosisandtumour'st

5、ageswasinvestigated,nostatisticaldifferencewasfound.Conclusions:ThemutationsofBRCA1geneareinvolvedincarcinogenesisanddevelopmentofprimaryovariancancer.　　Keywords:Primaryovariancancer;BRCA1gene;Mutation;PCR?SSCP;Sequencing　　BRCA1基因是在乳腺癌发生的生化基础未知的情况下，首先由美国Utah州大学Skolnick小组[1]采用定位克隆方法分

6、离出来的乳腺卵巢癌易感基因。迄今为止，其基因产物的功能、生物学作用尚不清楚。通过对基因侧翼的信息丰富的多态标记位点进行杂合性缺失(LOH)分析，发现在75％的原发性卵巢癌中存在包括BRCA1在内的17q缺失，提示BRCA1基因在卵巢癌中起着一定的作用[2]。本文对BRCA1基因在原发性卵巢癌组织中的突变情况进行研究，旨在阐明BRCA1基因突变的特点及其在原发性卵巢癌演进过程中的意义。　　1　材料和方法　　1.1　标本来源　　经病理确诊的56例原发性卵巢癌及其癌旁正常组织取自中山医科大学附属第一医院妇科和附属肿瘤医院妇瘤科（癌标本编号为V1～56）。手术切除组织

7、迅速置液氮中冷冻，然后放入-70℃冰箱中保存备用。　　1.2　实验方法　　1.2.1　组织DNA的提取:将组织剪碎，放在匀浆器中研成匀浆，按常规酚氯仿抽提法[3]提取DNA，DNA沉淀溶于TE液中，DNA的纯度和浓度经紫外分光光度计测定计算。　　1.2.2　PCR扩增:本实验所用8对引物根据Sknolnick研究资料合成[4]，引物序列见表1。PCR反应体系为25μl，内含样品DNA0.1μg，10×PCR缓冲液2.5μl，4种dNTP各200μmol,每端引物20pmol,TaqDNA酶1.0U。用无菌矿物油覆盖，在PE480热循环仪中97℃5分钟后进行循环

8、:94℃30秒，55℃45秒，72℃6