tnfα对小鼠肾上腺皮质细胞系y1增殖、凋亡的影响

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1、TNFα对小鼠肾上腺皮质细胞系Y1增殖、凋亡的影响：方媛　,夏海鸣　,孙佳　,黄培林【摘要】目的:探讨肿瘤坏死因子α(TNFα)对小鼠肾上腺皮质细胞系Y1增殖、凋亡的影响。方法:不同浓度、不同作用时间的TNFα处理小鼠肾上腺皮质细胞系Y1;MTT法检测细胞的增殖;台盼蓝拒染法检测细胞增殖抑制;流式细胞仪检测细胞的凋亡水平;分光光度法检测细胞caspase8/3的变化。结果:不同浓度的TNFα处理Y1细胞不同时间后,细胞的增殖能力明显下降(P<0.05);细胞凋亡水平明显提高(P<0.05);细胞caspase8/3水平明显升高(P<0

2、.05)。结论:TNFα可抑制Y1细胞增殖,并通过提高caspase8/3的活性而诱导及促进细胞凋亡。【关键词】肿瘤坏死因子α;Y1细胞;增殖;凋亡;caspase8;caspase3　　[Abstract]Objective:Toinvestigatetheeffectsoftumornecrosisfactorα(TNFα)onproliferationandapoptosisofmouseadrenalcortexcelllinesY1.Methods:ThemouseadrenalcortexcelllineY1etryetry.Results

3、:Afterbeingtreatedarkablyhighered(P<0.05).Conclusion:TNFαcaninhibitproliferationofY1cells,andinduceandpromotetheapoptosisbyincreasingcaspase8/3activity.　　[Keyornecrosisfactorα;Y1cells;proliferation;apoptosis;caspase8;caspase3　　肿瘤坏死因子α(TNFα)是一种主要由单核巨噬细胞产生的单核因子,具有选择性地杀伤某些哺乳类动物

4、的肿瘤细胞,并通过半胱天冬酶级联介导和活化激活蛋白1、核因子κB两个转录因子的通路诱导其凋亡。近些年来,TNFα对内分泌细胞的作用逐渐受到关注。2007年,Mikhaylova等[1]研究发现,TNFα可以降低人类肾上腺皮质NCIH295R细胞的增殖活性并诱导其凋亡。但是,它诱导内分泌细胞凋亡的机制目前尚不明确,而且不同细胞对TNFα的敏感性亦不相同。本研究旨在探讨TNFα对小鼠肾上腺皮质细胞增殖、细胞凋亡及其可能机制,为今后深入了解TNFα介导的炎症反应对小鼠肾上腺皮质功能的影响提供实验基础。　　1材料和方法　　1.1材料　　小鼠肾上腺皮质细胞系Y

5、1(中国科学院上海细胞生物研究所);肿瘤坏死因子α(TNFα)(Peprotech公司);F12培养基(GIBCO公司)、胎牛血清(杭州四季青公司)、MTT(GIBCO公司)、DMSO(Sigma公司);台盼蓝染液(南京生兴生物技术有限公司);AnnexinVFITC及PI细胞凋亡检测试剂盒(南京凯基生物公司);caspase8/3分光光度法检测试剂盒(南京凯基生物公司。　　1.2方法　　1.2.1细胞培养小鼠肾上腺皮质细胞系Y1用含10%的胎牛血清、1.176gNaHCO3及100IU·L-1青链霉素的F12培养液,在体积分数为0.05的CO2、3

6、7℃、湿饱和的条件下培养。细胞生长至80%融合时,用0.25%的混合胰酶消化后按1瓶传至2～3瓶进行传代,取其对数生长期细胞进行实验。　　1.2.2MTT比色法检测细胞增殖将处于对数生长期Y1细胞用0.25%的胰酶消化,进行细胞计数,调整浓度为1×105ml-1,将细胞均匀接种96孔培养板,每孔200μl,每孔细胞约为2×104个。过夜贴壁后,更换无血清培养液,培养24h后实验组分别加入100、200、250U·ml-1的TNFα200μl。阴性对照组加入等体积的F12培养液。细胞在体积分数为0.05的CO2、37℃条件中分别培养6、12、24、48h

7、后,加入5mg·ml-1MTT20μl,37℃继续孵育4h,终止培养,小心吸弃培养上清,每孔加入150μl二甲基亚砜(DMSO),振荡10min,使结晶充分溶解。在酶标仪上测定波长为490nm的OD值,最后以抑制率为纵坐标,以时间为横坐标,绘制生长曲线。实验重复3次。药物对细胞增殖的抑制率(IR)=[1-(用药组测定的平均OD值/对照孔测定的平均OD值)]×100%。　　1.2.3台盼蓝拒染法检测细胞数目取对数生长期的Y1细胞,调整细胞浓度为1.0×105～2.0×105ml-1,接种于6孔板,每孔1ml,用药组分别加入100、200、250U·ml-

8、1的TNFα1ml,每组设3个平行孔,并设阴性对照组。细胞加药后在体积分数为0.05的CO2、