吴茱萸碱对涎腺腺样囊性癌细胞系accm增殖和凋亡的影响

《吴茱萸碱对涎腺腺样囊性癌细胞系accm增殖和凋亡的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯4研究论文吴茱萸碱对涎腺腺样囊性癌细胞系ACC．M增殖和凋亡的影响前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯8一刖舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯9结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯16附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯18附表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯24

2、讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯26结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯28参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯29综述腺样囊性癌及其治疗进展的研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯30致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯41个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯42中文摘要吴茱萸碱对涎腺腺样囊性癌细胞系ACC．M增殖和凋亡的影响摘要目的：涎腺腺样囊性癌(salivaryadenoidcysticcarcinoma)是最常见的

3、恶性肿瘤之一，在口腔颌面部恶性肿瘤中居第二位。浸润性极强和易发生远处转移是腺样囊性癌的重要特征。即使手术切除后也常有局部复发和远处转移，其远处转移率在口腔颌面部居首位。涎腺腺样囊性癌的发病及转移机制目前尚不清楚。因此有必要探索新的治疗方法，以期提高对腺样囊性癌的疗效，减少局部复发和远处转移的发生，改善患者的生存质量。中药吴茱萸为芸香科植物吴茱萸干燥近成熟果实，吴茱萸碱(evodiamine)为其主要活性物质。吴茱萸有温中散寒，疏肝止痛之功效，常用于脘腹冷痛，呕吐腹泻，头痛胃痛和痛经等。近代医学亦证

4、明吴茱萸有镇痛，安神，抗菌，降压，抗肿瘤等药理作用。但是吴茱萸碱否能诱导涎腺腺样囊性癌细胞的调亡或坏死，国内外尚未见报道。本研究拟对体外培养的人涎腺腺样囊性癌ACC．M细胞经不同浓度、不同时间吴茱萸碱作用后，采用流式细胞术等检测细胞凋亡情况，观察不同浓度、不同作用时间下吴茱萸碱对ACC．M细胞系是否有诱导凋亡作用，探讨其可能的机制。并为临床上采用吴茱萸碱治疗涎腺腺样囊性癌提供理论依据。方法：1材料ACC．M：上海交通大学口腔颌面外科实验室提供，建立于1995年；吴茱萸碱：中国药品生物制品检定所提供

5、。2方法(1)药液配制吴茱萸碱用DMSO溶解配制成20mg／ml储存液，使用前用培养液稀释(DMSO浓度低于0．001％，对细胞无影响’l。(2)细胞培养：采用RPMll640培养基加入lO％胎牛血清和青霉素(100U／m1)、链霉素(100pg／m1)，于37℃、5％C02恒温箱内饱和湿度培养，24,--一，48小时传1代，以O．04％EDTA和O．25％胰蛋白酶(1：1)混合液消化传代。(3)MTT比色试验：取对数生长期细胞制成2．O×107／L细胞悬液，接种于96孔板，每孔100ul，培养2

6、4h后，加入吴茱萸碱100ul，使终浓度为0．01、0．1、l、中文摘要10、100ug／ml，设对照组和调零孔，每组5个复孔。继续培养24、48、72h后，每孔加入59／L的MTT溶液20ul，再培养4h后吸去全部上清液，然后每孔加入200ul二甲基亚砜，振荡摇匀，使结晶充分溶解，置酶标仪上测各孔吸光度值计算生长抑制率，按作图法求出不同处理时间的IC50(生长抑制率为50％的药物浓度)。(4)倒置相差显微镜观察：将细胞接种于50ml培养瓶中，倒置显微镜观察细胞在空白培养基和含药培养基中不同培养时

7、间的生长状况。(5)光镜观察：将细胞接种于6孔板中，孔中放置盖玻片，爬片成功后加入空白或含药培养基，培养不同时间后，瑞姬染色，光镜观察。(6)流式细胞术检测：用空白培养基和不同浓度的含药培养基处理细胞不同时间后，Annexin．V-FITC和PI双标记活细胞，流式细胞仪检澳0细胞凋亡情况。3统计分析使用SPSSl0．0统计学软件，应用SNK．q检验、相关分析以及妲检验对吸光度值、生长抑制率和凋亡率进行统计学分析结果：1MTT比色试验：吴茱萸碱(1ug／ml以上)对ACC．M细胞具有明显的生长抑制作

8、用，药物作用24h、48h、72h后的IC50分别为6．5ug／ml、4．5ug／ml和0．85ug／ml；最大生长抑制率可达89％。经统计学分析，各时间组不同浓度之间吸光度值明显不同(P<0．05)，各浓度用药组不同处理时间之间生长抑制率不同(P<0．01)，药效与药物浓度和作用时间具有明显的正相关性。2倒置显微镜观察：对照组的细胞贴壁生长，呈扁平多角形，胞质饱满，靠近中央处有圆形的细胞核，细胞生长迅速，呈“铺路石"状生长；用药组的细胞生长明显减慢，并且可见有细胞脱落，贴壁的细胞