甘草酸对涎腺腺样囊性癌saccm细胞系增殖和凋亡的影响

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1、目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯4研究论文甘草酸对涎腺腺样囊性癌细胞SACC．M细胞系增殖和凋亡的影响前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯8刖舀⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯8材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯9结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯16附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯l8附表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯25讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯28结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯30参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3l综述甘草中主要成分抑制肿瘤作用的研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯34致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯46个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯47IIllIlIIIIllIIIIIIIII＼1901768甘草酸对涎腺腺样囊性癌细胞系SACC．M增殖和凋亡的影响摘要目的：涎腺腺样囊性癌(salivaryadenoidcysticcarcinoma，SACC)是最常见的恶性肿瘤之一，在口

3、腔颌面部恶性肿瘤中居第二位。浸润性极强和易发生远处转移是腺样囊性癌的重要特征。即使手术切除后也常有局部复发和远处转移，其远处转移率在口腔颌面部居首位。涎腺腺样囊性癌的发病及转移机制目前尚不清楚。因此有必要探索新的治疗方法，以期提高对腺样囊性癌的疗效，减少局部复发和远处转移的发生，改善患者的生存质量。中药甘草，系双子叶植物豆科多年生草本植物，是我国著名的传统中药，临床应用最为广泛，甘草酸(GlycyrrhizicAcid，GA)是其主要活性成分之一。如今，甘草广泛应用于抗炎、抗病毒、抗变态反应、免疫调节、治疗消化性溃疡以及保护神经等方面，近

4、年来相继有研究显示甘草及其主要成分具有抗肿瘤的作用，但甘草酸是否有诱导腺样囊性癌细胞凋亡的作用，国内外尚未见报道。本研究拟对体外培养的人涎腺腺样囊性癌SACC．M细胞经不同浓度、不同时间甘草酸作用后，观察不同浓度、不同作用时间下甘草对人涎腺腺样囊性癌SACC．M细胞系是否具有抑制其增殖和诱导其凋亡的作用，探讨其可能的机制，并为临床上采用甘草酸治疗涎腺腺样囊性癌提供理论依据。材料与方法：1材料SACC．M：上海交通大学口腔颌面外科实验室提供；建立于1995年；甘草酸：东京化成工业株式会社(TCI)，纯度为97％(Ⅷ，LC)2方法(1)药液配

5、制甘草酸用RPMI1640培养液配制成25mmol／L储存液，使用前用1640培养液稀释。(2)细胞培养：采用RPMll640培养基加入1O％胎牛血清和青霉素(100U／m1)、链霉素(1001xg／m1)，于37"C、5％C02恒温箱内饱和湿度培中文摘要，24"'48小时传1代，以0．04％EDTA和0．25％胰蛋白酶(1：1)混合液消化传代。(3)MTT比色试验：取对数生长期细胞制成2．O×105／mL细胞悬液，接种于96孔板，每孔1001xl，培养24h后，分别加入甘草酸溶液1009l，使终浓度为2．5、5．0、7．5、10．0、1

6、2．5mmol／L，并设对照组和调零孔。继续培养24、48、72h后，每孔加入59／L的MTT溶液20#，再培养4h后吸去全部上清液，而后每孔加入200p,l二甲基亚砜，振荡摇匀，使结晶充分溶解后，置酶标仪上测各孔吸光度值，并计算生长抑制率。(4)倒置相差显微镜观察：将细胞接种于25ml培养瓶中，于倒置镜下观察细胞在空白及含药培养基中，培养不同时间后的生长状况。(5)光镜观察：在6孔板中放置盖玻片，将细胞接种于其中，爬片成功后加入空白或含药培养基，培养不同时间后，Giemsa染色，光镜观察细胞形态。(6)流式细胞术检测：空白培养基和不同浓

7、度的含药培养基将细胞处理不同时间后，使用Annexin．V-FITC和PI双标记活细胞，流式细胞仪检测细胞凋亡情况。3统计分析使用SPSSl0．0统计学软件，应用方差分析、相关分析以及u检验对生长抑制率和凋亡率进行统计学分析。结果：1MTT比色试验：甘草酸对SACC．M细胞具有明显的抑制生长作用，最大生长抑制率可达80．4％。经统计学分析，不同浓度用药组处理不同时间之间生长抑制率不同(尸

8、有圆形的细胞核；用药组的细胞生长速度明显减慢，并且可见有细胞脱壁，贴壁的细胞变圆，胞质皱缩，细胞变小，细胞间连接松解，核颜色加深，细胞的折光性增强。3光镜观察：对照组的细胞大，核浆比例大，并可